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目的脑缺血再灌注后以神经元为主的坏死与细胞凋亡是脑损伤中重要的病理生理过程。其中,细胞凋亡的重要作用日益受到重视。与坏死不同,其为一可逆的过程。抑制细胞凋亡,可以减少脑梗死的体积。死亡受体凋亡途径(Fas/FasL途径)是细胞凋亡的重要途径,Fas-FasL结合促进了脑缺血后神经细胞的凋亡过程。fas基因是最重要的促细胞凋亡基因之一。神经生长因子(NGF)是最早发现的具有神经营养和促突触生长双重生物学功能的一种细胞调节因子。给予外源性NGF可以减少迟发性神经元死亡,起到保护神经元的作用。关于NGF是否可以通过抑制Fas蛋白的表达来减少缺血神经元的凋亡尚未见报道。本实验采用免疫组化法及TUNEL法分别检测NGF对大鼠脑缺血再灌注后Fas表达及细胞凋亡的影响,进一步探讨NGF对脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法1.实验动物与分组健康雄性wistar大鼠30只,体重160-220克,由中国医科大学实验动物中心提供。随机分为2组:(1)缺血再灌注+生理盐水(NS)组15只;(2)缺血再灌注+NGF组15只。两组按再灌注时间分为再灌注6小时、24小时、48小时3个亚组,每亚组5只。2.试剂Fas免疫组化试剂盒、TUNEL试剂盒(武汉博士德公司),NGF(30μg/支)(舒泰神北京药业有限公司)。3.动物模型制作参阅文献,采用双侧颈总动脉夹闭法造成简单的前脑缺血模型,30min后松夹即为再灌注。再灌注开始时,NGF组予NGF0.1ml(30μg/ml)肌注,NS组予等量NS肌注。4.方法采用免疫组化法检测海马CA1区Fas蛋白产物的表达,用TUNEL染色检测该区的凋亡细胞。NS组与NGF组各相应亚组之间Fas蛋白阳性产物平均光密度值(AOD)的比较采用t检验,凋亡细胞率的比较采用x~2检验。结果1.免疫组化染色结果:再灌注后6h,NGF组Fas蛋白平均光密度值小于NS组(分别为0.3333±0.0033、0.3471±0.0030),具有显著性差异(P＜0.001)。再灌注后24h,NGF组也小于NS组(分别为0.3182+0.0074、0.3406±0.0210),具有显著性差异(P＜0.05)。再灌注后48h,NGF组与NS比较无显著性差异(分别为0.3476±0.0035、0.3474±0.0035,P＞0.5)。2.TUNEL染色结果:再灌注后6h、24h、48h,NGF组TUNEL阳性细胞率均低于NS对照组,具有显著性差异(P＜0.005)。结论1.NGF可以抑制脑缺血再灌注后海马CA1区Fas蛋白的表达。2.NGF可以减少脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的凋亡,从而减轻神经元损伤,发挥其神经保护作用,其中途径之一是抑制了最重要的促凋亡基因—fas基因产物的表达。