NFAT家族在肺癌中的表达和功能研究

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转录因子NFAI、家族(nuclear factor of activated T cells,T细胞活化核因子)的功能在细胞增殖、发育与分化和肿瘤的发生和发展中已被报道,但在肺癌中的研究国内外尚未报道。 本研究中,选取130例肿瘤和正常的配对的原发性非小细胞肺癌组织,采用免疫组织化学的方法检测NFAI、蛋白的表达状况。结果发现,NFAq、蛋白在96例肿瘤组织中表达(73.8%),在64例正常组织中表达(49.2%),在85例肿瘤组织中较配对的正常组织中高表达(65.4%),其中,在48例腺癌和37例磷癌中高表达。结合病理资料用SPSS软件统计发现,NFAT蛋白的表达状况和肺癌的侵犯(p=0.031)、病理类型(p=0.0001)和吸烟史(p=0.024)和分化程度(P=0.045)有关,与病理分期(pTNM)、家族史和五年生存无相关性。经多变量回归分析发现,NFAT家族蛋白的高表达与吸烟史(p=0.009)和病理类型(p=0.0001)相关。 采用RT-PCR方法在30对2004-2005期的肿瘤和正常配对的原发性非小细胞肺癌组织中检测NFAT家族成员的表达状况,结果是NFATcl和NFATc3在肿瘤中高表达,其比例分别是60%和66.7%,基本上与免疫组织化学染色结果一致(60%),揭示NFAT蛋白在原发性非小细胞肺癌组织的异常表达可能是由于NFATcl和NFATc3在mRNA水平的高表达引起。 采用测序的方法在上述30例肿瘤组织中筛选NFATcl和NFATc3N端调控区域的突变情况,结果在NFATcl的第二个外显子中筛选到了4个SNP同义位点,其中一个已在SNP数据库中有收录,另外3个是首次发现,揭示突变可能不是NFAT蛋白在原发性非小细胞肺癌组织中异常表达的原因。 为了进一步研究NFMT家族在肺癌中的作用机制,筛选了NFAT蛋白在7株肺癌细胞系中的表达状况。细胞免疫化学和RT-PCR的方法检测发现,NFAT家族在Anip973、A549、H520和H460细胞系中表达相对较高,而在Glc-82和H460细胞系中表达较低。经NFAT-luciferase报告基因分析后,NFAT蛋白的转录活性在Anip973、A549、H520和H460细胞系中相对较高,在Glc-82和H460细胞系中表达较低,基本上与NFAT的表达状况一致。加入CsA和FK506后,NFAT的转录活性在Anip973有所下降,但在A549、H520和H460中却有所上升;加入Ionomycin及其与CsA和FK506的组合后, NFAT的转录活性在Anip973、A549、H520和H460中却大幅度下降。结果揭示,NFAT蛋白在肺癌中可能不受钙离子/calcineurin通路调控。 总上所述,NFA7、家族可能在肺癌的发生和发展中发挥重要的作用。
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