大肠埃希氏菌对消毒剂和/或血清应激的双组分调节系统的研究

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大肠埃希氏菌E.coli是一种重要的原核模式生物,对阐明有关生物学意义具有重要作用。本研究以Ecoli K-12作为研究对象,用于研究CpxA/CpxR双组分调节系统在细菌消毒剂耐受以及细菌趋化性系统在补体伤害中的作用。首先采用基因工程手段克隆和表达了cpxA和cpxR并制备了相应的抗体,然后分别测定3种消毒剂乙醇、异丙醇以及苯酚对各试验菌株的抑制率,同时利用western blotting方法测定乙醇、异丙醇和苯酚刺激条件下E.coil K12中cpxA和cpxR以及cpxA和cpxR基因敲除菌株中OmpC和OmpF表达量的变化,证实了CpxA/CpxR双组分调节系统在乙醇、异丙醇和苯酚耐受中起着重要作用,同时也证实了OmpC和OmpF同时受到两个双组分调节系统EnvZ/OmpR和CpxA/CpxR的双重调节。同时还通过基因工程手段克隆了大肠埃希氏菌趋化性系统主要组分cheB,cheW和cheY,并制备了相应的抗体,然后分别测定人血清在不同培养条件下对各试验菌株的抑制率,同时利用western blotting方法测定人血清刺激条件下cheB、cheW、cheY、cpxA以及cpxR表达量的变化。发现cheB、cheW和cpxR高表达后可以增加补体对细菌的伤害作用,而cheY和cpxA高表达后可以减弱补体对细菌的伤害作用。Western blotting分析结果同上述结果一致。结果表明细菌的趋化性系统与细菌的补体伤害密切相关,双组分系统CpxA/CpxR也参与到这个过程中。
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