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获得性免疫缺陷综合征，简称艾滋病(AIDS)，是由免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种严重的传染性疾病。自从美国于1981年首次发现并定名以来，艾滋病以惊人的速度在全球传播。其流行规模之大，罹患人数之多，造成人类生命与社会经济损失之大均已超过历史上任何一种传染病。目前我国的艾滋病疫情仍呈上升趋势，发病和死亡依然严重，存在疫情进一步蔓延的危险。对HIV感染者进行HARRT治疗时检测患者体内的病毒载量是评价治疗效果的有效手段。RNA病毒载量检测法是目前较为敏感、应用较为广泛的方法。但现有的RNA病毒载量检测方法的检测仪器、检测试剂价格昂贵，且操作复杂，难以在一般实验室推广，也不适合广泛的临床应用。因此，价格相对便宜，操作简单的高灵敏度P24抗原检测方法的建立成为在发展中国家进行HIV病毒载量测定一种选择。本文对高质量的HIV-1 P24诊断用抗原、单抗、多抗，制备HIV-1P24病毒载量测定试剂盒进行了研究。主要内容包括：
⑴HIV-A1 P24抗原的表达和纯化：用套式多聚酶链式反应(nested-PCR)扩增HIV-A1 P24全长基因，并在基因上下游引入了酶切位点；然后P24基因插入到原核表达载体pTXB1中，构建原核表达质粒。该表达载体在大肠杆菌BL21中能够高效表达，使用破菌、几丁质亲和层析等步骤纯化P24抗原，纯化效果大于95％。
⑵HIV-1 P24单克隆抗体的制备与纯化：用本科室保存的HIV-B亚型P24抗原免疫小鼠，用ELISA方法检测小鼠的体液免疫反应。最后一次免疫后一周，取小鼠脾细胞与sp2/0细胞进行融合，制备杂交瘤细胞。用有限稀释法并结合药物筛选的方法对细胞进行筛选，最终筛选到4株能够分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。将筛选到的细胞分别放大培养，并收获大量含有P24单抗的细胞上清。利用饱和硫酸铵沉淀法、蛋白G亲和层析的方法纯化P24抗原。
⑶HIV-1 P24多克隆抗体的制备与纯化：用本科室保存的HIV-B亚型P24抗原免疫兔子，用ELISA方法检测兔子的体液免疫反应。最后一次免疫后一周，采用颈动脉采血法，获得大量含有P24多克隆抗体的兔血清，经多次正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法对收获的P24兔多抗进行了纯化。最后用生物素对兔多抗进行了标记。
⑷HIV-1 P24病毒载量测定试剂盒的初步建立和考核：使用本研究中制备的P24单克隆抗体、P24多克隆抗体，制备了HIV-1 P24病毒载量测定试剂盒，同时建立了试剂盒的标准步骤、P24抗原标准品和溶液体系(包括包被液、封闭液、稀释液、洗液)。最后对试剂盒的灵敏性和稳定性方面进行了初步考核。其最低检出浓度可达72pg/ml。