对致病疫霉具拮抗作用的真菌XF的鉴定及抑菌活性研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 17次 | 上传用户:fengliming33645
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XF是对致病疫霉(Phytophthora infestans)有较强拮抗作用的生防真菌,XF1,XF2和XF3是XF的3个菌株。经过平板对峙培养法测定,3个菌株对P.infestans的抑菌带宽度均可达1.6cm,且病原菌与拮抗菌之间形成的抑菌带的宽度不随时间的推移而显著改变。抑菌谱试验表明,生防菌株XF1未对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)、大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)表现出拮抗作用。根据形态进行鉴定,将生防真菌XF初步确定为半知菌附球菌属真菌(Epicoccum)。通过分子方法,对XF的ITS区段进行PCR扩增、测序,通过Blast比对,最终将XF鉴定为半知菌附球菌属黑附球菌(Epicoccum nigrum)。对生防菌株XF1生物学特性的研究表明,在黑麦培养基上XF1的菌丝土黄色,菌丝上有较多黑色孢子产生;而在Czapek培养基上,菌落形状不太规则,呈椭圆形,菌丝呈白色绒状,较为稀疏,菌落上未发现有孢子产生;在PDA培养基上,菌落椭圆形,菌丝为土黄色,未见有孢子产生;在PSA培养基上,XF1菌落圆形,菌丝土黄色,未发现有孢子产生,在菌落上有扇形变异,变异区域菌丝质地薄,颜色为浅黄色,可见,黑麦培养基是生防菌株XF1营养生长和产孢较为理想的培养基。XF1菌丝在5~35℃均能生长,最适温度为28℃,高于35℃时不生长。在pH4~12的范围内都能生长,适宜pH值为6~9,最适为pH7,在中性及碱性条件下XF1菌丝扩展较快,而在酸性培养基中,菌丝皱缩变形,扩展很慢。XF1能利用各种碳源,以麦芽糖,葡萄糖的利用最好,但在柠檬酸三钠上菌丝不生长:XF1能不同程度的利用各种无机和有机氮源,以对蛋白胨,硝酸钠和硝酸钾的利用最好。XF1的分生孢子在5~35℃均能萌发,在20℃萌发率最高,12h后孢子萌发率为80%以上,24h后孢子萌发率可达90%以上。不同温度对生防菌株XF1产孢的影响的试验结果表明,18℃时产孢量最大,低于或高于18℃时,产孢量逐渐减少。经40、41和42℃温热处理,24h后的孢子萌发率分别为17.6%、14.6%和2%,43℃处理10min后孢子完全失去萌发能力。对生防菌株XF1进行液体发酵培养,得到菌丝和发酵液,对菌丝和发酵液两部分的活性成分进行分离纯化。菌丝的水相提取液和发酵液浓缩液去除多糖后,对P.infestans有很强的抑制作用。生防菌株XF1胞外去除多糖后余液(WQT)对P. infestans孢子囊萌发和菌丝生长的抑制中浓度(EC50)分别为576.3μg/mL和850.1μg/mL;生防菌株XF1胞内去除多糖后余液(NQT)对P. infestans孢子囊萌发的抑制中浓度(EC50)为1301.1μg/mL;因为处理液是经过蒸馏水100℃浸提得到的,所以XF1的抑菌活性物质具有热稳定性。
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