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颅咽管瘤是颅内最常见的先天性肿瘤，占全年龄组颅内肿瘤的4.7％～6.5％，在儿童鞍区肿瘤中，颅咽管瘤约占50％左右。尽管颅咽管瘤在组织学上呈良性表现，术后易复发，即使肿瘤全切复发率仍达5％～30％；颅咽管瘤术后对周围重要结构影响大，遗留严重并发症严重影响了患者的生存质量和存活期，因此被称为具恶性行为的良性肿瘤。颅咽管瘤大部分有钙化，成年人肿瘤钙化率约60％，小儿颅咽管瘤则85％以上都有钙化。颅咽管瘤的钙化是影响肿瘤全切并导致术后复发的一个重要因素，大量临床资料表明大块的肿瘤钙化灶常常与视交叉、三脑室底部、颈内动脉、鞍膈等结构紧密粘连，手术剥离为困难，稍有不慎往往造成严重的后果；如果不切除钙化，可能会有瘤组织的残存，肿瘤的复发将成必然。颅咽管瘤的钙化原因目前仍没有定论。目前国内外的研究显示骨桥蛋白（Osteopontin, OPN）是一种与生理性、病理性钙化密切相关的分泌型的基质蛋白。OPN是骨骼和牙齿矿化细胞外基质的主要组成成分，在不同的组织细胞中均有发现。OPN既是一种黏附蛋白，又是一种细胞因子，其氨基端有9个天冬氨酸，组成一个高度酸性区域，对羟基磷灰石有结合能力，是联系骨细胞与羟基磷灰石间的“桥梁”。在OPN分子中10～12个门冬氨酸残基的重复序列，形成的强负电荷性是OPN与骨矿物质结合的重要结构基础。OPN与钙化的骨基质、异位骨化组织和动脉钙化灶有极高的亲和性，这是因为OPN与Ca2+有很高的亲和性，是骨矿化和磷酸钙结石形成的重要原因。本研究旨通过对颅咽管瘤中OPN的研究寻找颅咽管瘤钙化的原因，探讨OPN与颅咽管瘤钙化之间存在的量效关系，探讨是否可以在临床手术治疗颅咽管瘤前进行干预，从而降低手术难度、提高肿瘤全切率、减少颅咽管瘤的复发。因此，研究OPN在颅咽管瘤中的表达及调节机制具有重要的临床意义。临床资料与方法1．研究对象以2004年6月～2006年3月在我科进行手术治疗的颅咽管瘤病人为研究对象。入选患者共54例，其中男31例，女23例，年龄3～66岁，平均年龄26.5±18.4岁。病例纳入标准：①研究期间所有在我科进行手术治疗的颅咽管瘤患者；②术后病理证实为颅咽管瘤。2．实验处理本研究分两部分：一，收集颅咽管瘤标本，探讨OPN与颅咽管瘤钙化之间的量效关系：1．以术前的头部CT资料作为辅助，根据手术中所见颅咽管瘤钙化情况将颅咽管瘤的钙化程度分为4级：无钙化定为（—）；散在小点片状钙化定为轻度钙化（+）；蛋壳样钙化定为中度钙化（++）；大点片状、骨样钙化（直径＞0.5 cm）定为重度钙化（+++）；2．运用免疫组织化学、Western Blot检测肿瘤组织中OPN的表达量；3．运用免疫组化检测OPN受体CD44V6在颅咽管瘤组织中的表达情况。二，探讨颅咽管瘤的生物学特性：1．运用光镜及电镜观察两种类型颅咽管瘤的组织结构特征；2．运用免疫电镜观察颅咽管瘤细胞分泌OPN的组织学结构基础。3．统计学处理用SPSS10.0版本统计分析软件对计量资料各项指标测定结果以均数±标准差（（?）±S）表示。两组间计量资料的比较用独立样本t检验。多组间资料比较用单因素方差分析（ANOVA）检验，若有显著性差异，任意两组间比较当满足方差齐性时用SNK（Student-Neuman-Keuls）法，不满足方差齐性要求时用Tamhane’s T2法进行检验。对颅咽管瘤钙化程度与OPN表达量、CD44V6表达量进行Mann-Whitney U和Spearman秩相关分析统计学分析，以P≤0.05为有显著性差异。结果①根据HE染色情况判断肿瘤类型，将其分为两种类型即成釉细胞型41例，鳞状细胞型13例。成釉细胞型的颅咽管瘤钙化结构周围可见大量的骨小梁样结构，而在鳞状细胞型颅咽管瘤中未见到相应的类似结构。在囊壁切片中，钙化结构多发生于囊壁的内侧面，少部分贯穿囊壁。②钙化均发生于成釉细胞型颅咽管瘤；鳞状细胞型颅咽管瘤未见明显钙化。③在钙化明显的成釉细胞型颅咽管瘤中OPN阳性细胞多为包绕在钙化周围的细胞。经Spearman秩相关分析，在成釉细胞型中随着钙化程度的增加，OPN表达程度显著增强（rs=0.725，P＜0.001）。OPN在成釉细胞型颅咽管瘤中表达最为明显，主要在肿瘤细胞胞浆中，经Mann-Whitney U检验分析，OPN表达程度在成釉细胞型与鳞状细胞型之间存在显著性差异（Z=4.813，P＜0.001）。④Western Blot结果发现鳞状细胞型颅咽管瘤OPN的蛋白表达量（103.11±16.31）低于成釉细胞型颅咽管瘤的表达量（188.43±35.81），T检验结果t=5.12，P=0.000，P＜0.01，差别有统计学意义；在成釉细胞型颅咽管瘤中，各组颅咽管瘤OPN蛋白表达量均有显著性差异（P＜0.05），无钙化组（144.28±10.50）＜轻度钙化组（168.34±19.07）＜中度钙化组（205.28±16.83）＜重度钙化组（232.43±7.37）⑤CD44V6在成釉细胞型颅咽管瘤中表达最为明显，CD44V6阳性细胞围绕在钙化块周围，主要表达于成熟的肿瘤细胞，其表达强度随肿瘤细胞的成熟程度呈现明显的递增梯度；在鳞状细胞型颅咽管瘤也有表达CD44V6，也主要是在成熟的细胞胞膜上。经Mann-Whitney U检验分析，CD44V6表达程度在成釉细胞型与鳞状细胞型之间差别有统计学意义（Z=4.888，P＜0.001）。经Spearman秩相关分析，随着OPN表达的增加，CD44V6表达程度显著增强（rs=0.856，P＜0.001）。⑥OPN免疫电镜显示成釉细胞型颅咽管瘤中金标OPN颗粒的产生位于肿瘤细胞胞浆的内质网上，由内质网产生后分泌到胞外；而在鳞状细胞型颅咽管瘤细胞中未见金标OPN颗粒，少量可见颗粒仅见于肿瘤间质中的血管内皮细胞上。结论本研究显示：不同病理类型的颅咽管瘤OPN的表达程度不同。颅咽管瘤细胞具有分泌OPN的细胞学基础，颅咽管瘤钙化程度与OPN表达量之间存在着正向的量效关系，即随着OPN表达量的增加，颅咽管瘤的钙化程度加重。因此，OPN是影响颅咽管瘤钙化的重要细胞因子。