3-BrPA对结肠癌HCT-8细胞、HCT-8/V耐药细胞凋亡诱导作用及其机制研究

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目的:探讨三溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)对结肠癌HCT-8细胞、HCT-8/V耐药细胞凋亡诱导作用及可能的机制。  方法:MTT法研究3-BrPA对结肠癌HCT-8细胞及HCT-8/V耐药细胞存活率的影响;Hoechst33342染色法研究细胞凋亡变化情况;JC-1染色法研究细胞线粒体膜电位变化情况;Annexin V-FITC/PI双染法研究细胞凋亡率变化情况;Real-time PCR法在mRNA水平上研究结肠癌细胞多药耐药、糖代谢及凋亡相关基因(MDR1、HK2、Bax、Bcl-2及procaspase-3)的变化情况;western blot法在蛋白水平上研究结肠癌细胞多药耐药蛋白、糖代谢及凋亡相关蛋白(P-gp、HK2、Bax、Bcl-2及procaspase-3)的变化情况。  结果:1结肠癌HCT-8及HCT-8/V耐药细胞经3-BrPA处理24h、48h及72h,细胞存活率均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);2结肠癌HCT-8及HCT-8/V耐药细胞经3-BrPA处理24h,细胞形态变圆、胞膜完整、体积缩小及胞核固缩;3JC-1染色结果显示,结肠癌细胞经3-BrPA处理12h,细胞线粒体膜电位降低;4Annexin V-FITC/PI结果显示,结肠癌细胞经3-PrPA处理48h,细胞凋亡率明显增加,且存在剂量依赖性(P<0.05);5Real-time PCR结果显示,结肠癌HCT-8/V耐药细胞经3-BrPA处理24h,MDR1mRNA表达降低(P<0.05);结肠癌HCT-8及HCT-8/V细胞HK2、Bcl-2及procaspase-3mRNA表达降低;Bax mRNA表达升高(P<0.05);6western blot结果显示,结肠癌HCT-8/V耐药细胞经3-BrPA处理24h,P-gp表达降低(P<0.01);结肠癌HCT-8及HCT-8/V细胞HK2、Bcl-2及procaspase-3蛋白表达降低;Bax蛋白表达升高(P<0.01)。  结论:1、3-BrPA可降低结肠癌HCT-8及HCT-8/V细胞存活率并诱导凋亡;2、3-BrPA可降低结肠癌HCT-8/V耐药细胞MDR1mRNA及P-gp蛋白表达;3、抑制糖代谢关键酶及促进线粒体途径的细胞凋亡可能是3-BrPA诱导结肠癌HCT-8细胞及HCT-8/V耐药细胞凋亡的部分机制。
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