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[目的]1.观察高糖对大鼠海马神经元凋亡、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase, p38MAPK)及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminalkinases,JNK)信号通路的影响。2.探讨红景天苷、葛根素对高糖培养海马神经元凋亡、p38MAPK和JNK信号通路的影响。[方法]新生24h SD大鼠,取其海马,采用消化法分离海马神经元,密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化,神经元特异性烯醇化酶(Neuron-Specific Enolase, NSE)蛋白免疫荧光进行鉴定。设置25mmol/L葡萄糖(Glucose, Glu)为正常对照组及50、75、100、125mmol/L不同浓度葡萄糖的条件培养基,利用细胞增殖-毒性检测(Cell Counting Kit-8, CCK-8)比色法摸索高糖对海马神经元的最佳作用时间和作用浓度。在50mmol/L Glu的高糖培养基中,分别加入50μmol/L红景天苷、25μmol/L葛根素、10μmol/L p38MAPK通路抑制剂SB239063和10μmol/L JNK通路抑制剂SP600125。培养72h时CCK-8比色法观察海马神经元活性,TUNEL检测神经元的凋亡,Western Blotting检测神经元p-p38、p38、p-JNK和JNK蛋白表达。[结果]1.成功培养海马神经元,经鉴定纯度为95.4±2.3%。2.CCK-8检测细胞活性：海马神经元体外培养24h和48h时,各浓度葡萄糖组的细胞相对活性与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)。72h和96h时,各浓度葡萄糖组神经元的活性与正常对照组相比均明显受到抑制(P<0.05)。选定50mmol/L Glu作为高糖组,培养72h时红景天苷组和葛根素组的细胞相对活性较高糖组显著升高(P<0.05)。3. TUNEL检测细胞凋亡：高糖组与正常对照组比较,神经元凋亡率增加,具有统计学意义(P<0.01)；红景天苷组、p38MAPK抑制剂组、JNK抑制剂组与高糖组比较,神经元凋亡率均下降(P<0.01),葛根素组与高糖组比较,凋亡率下降(P<0.05)；红景天苷组、葛根素组与正常对照组比较,神经元凋亡率均增加(P<0.01), p38MAPK抑制剂组、JNK抑制剂组与正常对照组比较,神经元凋亡率均增加(P<0.05)；红景天苷组、葛根素组、p38MAPK抑制剂组、JNK抑制剂组间比较凋亡率无显著性差异(P>0.05)。4. Western Blotting检测蛋白表达：高糖组与正常对照组比较,p-p38/p38的表达增加(P<0.01)；p38MAPK抑制剂组与正常对照组比较,p-p38/p38的表达减少(P<0.01)。红景天苷组、葛根素组、JNK抑制剂组、p38MAPK抑制剂组与高糖组比较,p-p38/p38的表达均减少(P<0.01)；红景天苷组、葛根素组、JNK抑制剂组与正常对照组相比,p-p38/p38的表达均增加(P<0.01)。红景天苷组与葛根素组相比无统计学差异(P>0.05)。红景天苷组、葛根素组与SB239065组相比,p-p38/p38的表达均增加(P<0.01),与JNK抑制剂组相比,p-p38/p38的表达均减少(P<0.01)。高糖组与正常对照组比较,p-JNK/JNK的表达增加(P<0.01)；JNK抑制剂组与正常对照组比较,p-JNK/JNK的表达减少(P<0.01)。红景天苷组、葛根素组、JNK抑制剂组、p38MAPK抑制剂组与高糖组比较, p-JNK/JNK的表达均减少(P<0.01)；红景天苷组、葛根素组、p38MAPK抑制剂组与正常对照组比较, p-JNK/JNK的表达均增加(P<0.01)。葛根素组与红景天苷组相比,p-JNK/JNK表达减少(P<0.01)。红景天苷组、葛根素组与JNK抑制剂组比较,p-JNK/JNK的表达均增加(P<0.01),与p38MAPK抑制剂组比较,p-JNK/JNK的表达均减少(P<0.01)。[结论]1.高糖(50mmol/L)培养海马神经元72h时,对其活性具有抑制作用。红景天苷50μmol/L组、葛根素25μmol/L组可以提高高糖条件下海马神经元的活性。2.高糖条件下,海马神经元的凋亡增加,海马神经元p-p38/p38、p-JNK/JNK较正常对照组明显升高,提示p38MAPK和JNK信号通路激活,应用特异性抑制剂SB239063. SP600125后能将上述通路阻断并改善细胞凋亡的情况。3.红景天苷、葛根素能够减轻高糖培养下海马神经元的凋亡,降低p38MAPK和JNK信号通路中p38、JNK蛋白磷酸化的程度。[创新点]探索红景天苷、葛根素对高糖培养SD大鼠海马神经元凋亡及p38MAPK和JNK信号通路的影响。经检索国内外文献,高糖对体外培养海马神经元凋亡影响的报道已有多篇,但未见高糖是否经由p38MAPK及JNK通路诱导体外培养海马神经元凋亡的报道,亦未见红景天苷、葛根素对体外高糖条件下海马神经元凋亡的影响及其机制研究的报道。