鹅不食草抗肿瘤活性成分及其质量分析研究

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鹅不食草(Centipeda minima(L.)A.Br.et Ascher.)系菊科(Compositae)石胡荽属植物,一年生匍匐状草本,生长于海拔300~1900米的阴湿处。主产我国浙江、湖北、江苏、广东等地,国外主要分布在印度和锡南岛,阿富汗、东亚、澳大利亚和太平洋岛等地亦有分布。该药材收载于《中国药典》(2000版一部),具有通鼻窍、止咳喘的功效,临床用于风寒头痛、慢性鼻炎等病症。现代药理研究表明,鹅不食草具有抗菌、抗过敏、抗肿瘤等多种生理活性。作者对鹅不食草的物质基础进行了研究,从中筛选出一个生物活性化合物(短叶老鹳草素),首次证明其对多种肿瘤细胞具有很强的抑制作用。 本论文以水蒸气蒸馏法提取鹅不食草挥发油,然后用水煮醇沉法得到流浸膏,从两个部分中共分离和鉴定了31个化合物。采用溶剂法和色谱法从流浸膏中分离得到8个单体成分,通过UV、IR、NMR、MS等波谱技术鉴定了其中的5个化合物,分别为短叶老鹳草素(Ⅰ),槲皮素-3-甲醚(Ⅱ),槲皮素-3-3′-二甲醚(Ⅲ),3,3′,5,5′-四甲氧基-反-芪(Ⅳ),2-异丙基-5-甲基-对苯二酚-4-氧-β-D-W比哺木糖苷(Ⅴ)。 采用GC-MS分析技术,从挥发油中分离出50个色谱峰,通过NIST质谱库检索,鉴定了其中26个成分,分别为反式乙酸菊烯酯(Ⅸ)、麝香草酚(Ⅹ)、马榄烯(Ⅺ)、(isocomene,Ⅻ)、2,6,6-三甲基环己烯-1-磺乙酰苯(ⅩⅢ)、4,11,11-三甲基-8-亚甲基-双环-十一烷-4-烯(ⅩⅣ)、2-甲基-3-亚甲基-2-(4-甲基-3-戊烯基)-双环-庚烷(ⅩⅤ)、α-丁香烯(ⅩⅥ)、5-甲基-2-(1-甲基乙基)苯乙酸酯(ⅩⅦ)、2,3,7-三甲基-2,6-辛二烯丙酸酯(ⅩⅧ)、异石竹烯(ⅩⅨ)等。其中,麝香草酚、2-甲基-2,3-醋酸酯-5-甲基苯丙酸酯、5-甲基-2-(1-甲基乙基)苯乙酸酯、1,3,5-三甲基-1-乙烯基-4-己烯丁酸酯、2,3,7-三甲基-2,6-辛二烯丙酸酯和3,7-二甲基-丙酸-2,6-辛二烯-1-醇等23种成分为首次从该植物中发现。 以人体抗肿瘤细胞系为筛选指标,用流式细胞技术作为检测手段,对鹅不食草不同提取部位和单体化合物进行了抗肿瘤作用的筛选研究。药理试验表明,溶剂法分离得到的乙醚提取物、乙酸乙酯提取物和超临界CO2提取物具有明显的抗肿瘤作用,对hela肿瘤细胞的抑制率分别为96.76%、87.25%、95.94%。从乙醚部位分离和筛选到1个有效成分,经鉴定为短叶老鹤草素(Brevilin),属愈创木内酷型倍半菇类化合物。本试验研究首次证明该成分对胰腺癌、肝癌BEL一7402、乳腺癌MDA一MB一231等癌细胞具有很强的抑制作用,50陀/ml浓度时,对肝癌细胞BEL一7402、乳腺癌细胞MDA一MB一231的抑制率均可达到90%以上;对胰腺癌细胞、肝癌细胞BEL一7402、乳腺癌细胞MDA一MB一231的IC50值分别为11.6Pg/ml、2.opg/ml·3.6pg/ml。 对鹅不食草的超临界CO:提取物和水蒸气蒸馏的挥发油进行了比较研究,前者抗肿瘤作用明显强于后者。采用GC一MS分析方法,对两种提取物进行了比较分析。结果表明,两种方法得到的提取物中有n种成分相同,其中含量较高的为反式乙酸菊烯酷、棕搁酸等。超临界CO:提取物经GC一MS分离到50个色谱峰,通过NIS丁质谱库检索,鉴定了其中21个化合物,占总含量的64.37%,含量最高的成分为8,11一二烯一愈创木内酷一3一酮,相对含量13.70%,这种倍半菇类成分多具有抗肿瘤活性;水蒸气蒸馏提取物经GC一MS分离到50个色谱峰,通过NIST质谱库检索,鉴定了其中26个化合物,占总含量的84.65%,含量最高的成分为反式乙酸菊烯酷,相对含量39.76%,这类成分一般不具有抗肿瘤活性。这一研究结果与本论文药理试验结果十分吻合,从而阐明了超临界CO:萃取物和水蒸气蒸馏提取物抗肿瘤活性存在较大差异的原因。 在鹅不食草抗肿瘤活性成分研究的基础上,对该药用植物的性状、鉴别、检查、含量测定等方面进行了系统研究,制定了较明确的质量标准。以其有效部位为目标确定的薄层鉴别方法具有较强的专属性;以其抗肿瘤有效成分短叶老鹤草素为对照品建立的含量测定方法,具有灵敏度高,重现性好,专属性强的特点。从而完善了2000版《中华人民共和国药典》对该药材制定的质量标准,为鹅不食草药材的质量控制提供了科学依据。主题词:鹅不食草抗肿瘤成分 流式细胞仪气一质联用短叶老鹤草素结构鉴定超临界COZ萃取质量标准
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