【摘 要】
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松粳9号属于寒区超级稻品种,在黑龙江第一积温区广泛种植,受二化螟危害严重。本研究通过摸索松粳9号的组织培养体系、优化农杆菌介导遗传转化体系,利用混合农杆菌侵染松粳9号
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松粳9号属于寒区超级稻品种,在黑龙江第一积温区广泛种植,受二化螟危害严重。本研究通过摸索松粳9号的组织培养体系、优化农杆菌介导遗传转化体系,利用混合农杆菌侵染松粳9号愈伤组织将抗虫基因cry1C*和cry2A*转入松粳9号基因组,通过对转基因T0代植株进行Basra抗性筛选、PCR检测、Southern blot和室内抗虫性鉴定,对转基因T1代植株进行RT-PCR检测、Bt蛋白定量检测及农艺性状考查等步骤,获得了外源基因低拷贝整合、Bt表达水平较高、农艺性状未发生明显改变的转基因水稻株系。研究的主要结果包括:
(1)确定了以N685培养基为基本培养基,附加2mg／L2,4-D、0.2mg／L6-BA,适合超级粳稻松粳9号愈伤组织诱导及生长的培养基；
(2)建立了高效的具有籼稻血缘的寒区超级粳稻遗传转化体系,用分别含cry1C*和cry2A*表达载体的农杆菌混合菌液,对超级粳稻松粳9号进行遗传转化,转化效率及分化效率分别为12.74％和46.71‰
(3)在转基因水稻T0代,初步建立了以TT51及受体品种为参照的水稻抗虫性强弱评价体系；获得了抗虫性较好、外源基因低拷贝整合的转cry1C*、转cry2A*和cry1C*与cry2A*共转化植株；
(4)在转基因水稻T1代,转crylC*株系T1C-3和转cry2A*株系T2A-2分别表达最高量的cry1C*和cry2A*,cry1C*与cry2A*哄转化株系T1C+2A表达较高量的cry1C*和cry2A*,cry1C*和cey2A*叶片组织中的转录与翻译水平最高,在茎鞘与幼穗中的转录与翻译水平基本相同或稍有差异；二化螟对不同转基因株系叶片具有选择性取食的特性,当Bt基因类型相同时,二化螟优先取食Bt浓度低的转基因水稻叶片,当研基因类型不相同且表达量均较高时,二化螟优先取食转cry2A*植株叶片；在农艺性状上,有些转基因抗虫水稻结实率明显降低,三个Bt蛋白高表达株系T1C-3、T2A-2和T1C+2A与受体品种未见明显差别。
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