论文部分内容阅读
目的:检测IL-23P19/Th17在急性脑梗死患者外周血及Th17在小鼠pMCAO模型梗死灶周的动态变化:GFP-mBMSC移植对pMCAO小鼠神经功能及病理损伤程度的影响，对IL-23P19/Th17的免疫调控作用；初步探讨体外缺氧刺激下人外周血淋巴细胞Th17比率及IL-17A表达变化；初步探讨重组IL-23P19对小鼠神经元凋亡及星形胶质细胞AQP4表达的影响及分子机制。
方法:不同时间点采取不同程度脑梗死病人静脉血，设立轻、中、重度的梗死组共100例及健康对照组30例，进行NIHSS神经功能评定，应用ELISA/FACS技术检测IL-23P19/Th17动态变化，Real-time PCR检测ROR-γt mRNA水平；Longa法建立小鼠pMCAO模型，设立BMSC移植与对照组，通过Longa评分进行神经功能检测，免疫荧光双染法研究脑梗死灶周组织中Th17浸润情况，分析与梗死面积(TTC法)、水肿程度(干湿重法)及功能缺损的相关性；利用pMCAO小鼠，采取GFP-mBMSC静脉移植手段，免疫荧光显微镜下观察脑组织中GFP-mBMSC分布，电镜观察灶周神经元微观病理变化，ELISA检测IL-23P19/IL-17A表达变化；采取正常人外周血分离培养淋巴细胞，不同时间厌氧刺激下，ELISA/流式细胞技术检测IL-17A/Th17细胞变化。体外分离培养小鼠神经元，TUNEL法检测IL-23P19刺激对凋亡的影响；体外分离培养小鼠星形胶质细胞，应用PCR/Western blot分别检测不同时间剂量IL-23P19刺激后AQP4表达变化及分子机制。
结果:大面积脑梗死组IL-23P19/Th17/ROR-γt mRNA升高存在显著性差异(P<0.01)，于发病3天内达到高峰，与梗死面积、神经功能缺损程度及预后不良呈正相关；小鼠梗死灶周存在Th17细胞浸润，数量与梗死面积及炎性水肿程度正相关；mBMSC静脉移植可下调IL-23P19/IL-17A水平，改善pMCAO小鼠运动功能，逆转缺血引发的脑组织微观病理改变，减轻脑水肿程度，与对照组比较存在显著性差异，P<0.05；6小时缺氧刺激正常人外周血淋巴细胞使Th17比率IL-17A水平轻度上调:体外重组IL-23P19可促进小鼠神经元凋亡，通过NFκB途径时间剂量依赖性促进小鼠星形胶质细胞AQP4表达，并不依赖于其对细胞因子合成的刺激作用。
结论:IL-23P19/Th17参与脑梗死灶周脑组织损伤及全身免疫适应性反应，严重脑梗死引发病人外周血IL-23P19/Th17在3天内达到高峰，其效应核因子ROR-γt mRNA水平在4～7天达到高峰；小鼠pMCAO脑梗死灶周Th17细胞浸润数量与水肿程度呈正相关；体外缺氧6小时可轻度上调人外周血Th17比率及IL-17A水平；BMSC移植可抑制Th17免疫应答，改善梗死灶周神经细胞微观结构，减轻神经功能缺损及水肿程度；体外重组IL-23P19可促进小鼠神经元凋亡并通过NFγB途径促进星形胶质细胞AQP4表达。