论文部分内容阅读
为了探索黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)在雏鸡免疫器官中对TLR4信号转导通路的影响,本试验首先采用水提醇沉法提取黄芪粗多糖,Sevag法除蛋白得到精多糖APS,以葡萄糖为标准,苯酚-硫酸法测得该提取物糖含量为84.7%。之后,将140只7日龄雏鸡随机分为四组,即APS高剂量组(I组)、APS中剂量组(II组)、APS低剂量组(III组)和空白对照组(C组)。I、II、III组雏鸡于7日龄以灌服方式分别给予80 mg·m L-1、40 mg·mL-1、20 mg·mL-1APS液0.2mL,1次/天,连续5天,C组雏鸡以相同方式给予相同剂量生理盐水。14日龄时采取滴口方式进行鸡传染性法氏囊病活疫苗免疫。在首次给药后1、3、5、7天(即雏鸡8、10、12、14日龄)及疫苗免疫后7、14、21天(即雏鸡21、28、35日龄),每组随机抽取5只雏鸡,取其胸腺、脾脏、法氏囊,采用实时荧光定量PCR技术及免疫酶组织化学技术对各组雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊中的ch TLR4 m RNA与蛋白表达、ch TLR4信号转导通路衔接蛋白分子(ch My D88,ch TRIF)、转录因子(ch NF-κB,ch IRF3)及其诱导产物(ch IFN-β,ch TNF-α)m RNA的表达进行检测。结果显示,在各检测时间点,APS试验组雏鸡ch TLR4 m RNA表达量高于对照组或与对照组相当。其中胸腺组织中ch TLR4 m RNA表达量在雏鸡8日龄时APS高、中剂量组极显著高于对照组(p<0.01),接下来时高时低,之后与对照组持平,免疫后第三周其表达量又显著高于对照组(p<0.01),低剂量组ch TLR4 m RNA表达量也较对照组有所提高,但较高、中剂量组延迟。脾脏中chTLR4 mRNA表达量水平在APS高剂量组上调突出,从整个检测时间段来看,高剂量组和中剂量组APS显著上调了ch TLR4 mRNA表达,低剂量组效果不如高、中剂量组明显。法氏囊中ch TLR4 m RNA表达量在连续灌服APS后逐渐显著高于对照组(p<0.01或p<0.05),免疫后也保持着相对较高水平的表达,并且低剂量APS组对ch TLR4 m RNA表达量的上调作用要优于高、中剂量组。在各组织中,ch TLR4蛋白表达的变化趋势与ch TLR4 mRNA的表达变化基本一致。雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊中ch My D88,ch TRIF,ch NF-κB,ch IRF3 mRNA表达量随着ch TLR4 mRNA表达上调,也明显上调;细胞因子ch IFN-β,ch TNF-αmRNA表达量与空白对照组有一定的差异,在免疫前,试验组各免疫器官中ch IFN-β、ch TNF-αm RNA的表达量和对照组相比显著增高(p<0.01或p<0.05)或者持平,免疫后试验组ch IFN-β,ch TNF-αm RNA表达水平显著上调,整个试验阶段各个检测点与对照组相比较,结果有所不同。本研究表明,APS可激活雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊中ch TLR4信号转导通路My D88依赖途径和My D88非依赖途径,优化雏鸡免疫状态,进一步从雏鸡体内受体模式及信号转导的角度阐明APS调节雏鸡免疫功能的分子机制,为APS在提高雏鸡抗病能力的作用研究及APS在家禽养殖方面的科学应用提供科学依据。