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假俭草(Eremochloa ophiuroides(Munro.)Hack.)是禾本科蜈蚣草属暖季型多年生草本植物,其茎叶平卧或向上生长,形似蜈蚣,故名蜈蚣草。该草植株低矮、叶形优美,是世界三大暖季型草坪草之一。植物常会受到不利环境如寒冷、干旱、病虫、重金属污染的侵袭,这些不利环境会对植物的生长发育造成一定胁迫甚至伤害,并且对农业生产带来巨大的损失,所以本实验的研究目的就是通过农杆菌和基因枪转化法将SgNCED1与MfSAMS两个与植物抗性相关的目的基因转入到假俭草的愈伤组织中,通过愈伤组织的筛选、分化、生根过程得到再生植株,经过分子检测获得阳性植株;在转化过程中不断优化转化方法,为其它草坪草的转化和生物技术改良品种提供借鉴和参考,以下简述实验内容及实验结果:
1.农杆菌介导的假俭草转基因方法转入目的基因
以pOX-SgNCED1为载体,假俭草成熟胚性愈伤组织为受体进行农杆菌介导的转基因实验,共转化5970颗愈伤组织,得到89株再生苗,经PCR检测目的片段扩增,没有扩增到与目的片段大小相同的条带,显示为阴性。
2.利用GUS瞬时表达优化农杆菌法转化假俭草
以pCAMBIA1301为载体,转化后愈伤组织进行GUS染色检测基因的瞬时表达。本文中设计了使用不同培养时间的愈伤组织、高渗培养基、AS预培养以及超声波辅助侵染的不同处理,利用GUS染色瞬时表达获得了优化之后的农杆菌介导的假俭草转基因方法。
3.利用GUS瞬时表达优化基因枪法转化转化假俭草
以pAHC25为载体,优化实验方案,对愈伤组织进行不同时间的预培养,最后得到的数据表明,愈伤组织在预培养7天之后用来进行转基因的实验,可以得到较高的GUS染色率和较高的转化率。
4.利用基因枪法向假俭草基因组中转入目的基因
以pOX-SgNCED1为载体,假俭草成熟胚性愈伤组织为受体进行基因枪法转化,共转化4719颗愈伤组织,得到72株再生植株,经PCR检测目的片段扩增,检测到与质粒同样大小的条带,得到11株阳性植株。以pAHC-MfSAMS为载体,假俭草成熟胚性愈伤组织为外植体进行基因枪介导的转基因实验,共转化2418颗愈伤组织,移栽之后得到成活植株28株,经PCR检测目的片段扩增,没有扩增到与目的片段相同的条带,显示为阴性。