论文部分内容阅读
研究背景在男性发生的恶性肿瘤中,前列腺癌发病名列前茅,而且在癌症引起的死亡中占第二位。越来越多的研究证明了组蛋白乙酰化酶抑制剂(HDACIs)在治疗前列腺癌的过程中发挥了重要作用,其中丙戊酸(Valproic Acid, VPA)在前列腺癌的研究中显示了良好的疗效。已经有很多临床试验显示VPA具有抗肿瘤作用,最近的研究证明在多种不同的肿瘤细胞系中,VPA都显示出了明显的肿瘤抑制作用。我们先前的实验已经证明了VPA作为选择性一类和二类的HDACI,在体内及体外实验中都具有慢性长期阻滞肿瘤细胞增殖的疗效。本次研究中,我们采用几种不同的前列腺癌细胞系,研究了VPA诱导肿瘤细胞自噬与抑制肿瘤转移的作用,并且这一作用可能与Akt/mTOR信号通路的抑制,以及SPARCL蛋白家族的分泌有关。该项研究揭示了VPA抗前列腺癌作用可能的分子机制,也为VPA的临床应用提供了可能的理论研究基础。研究目的(1)对VPA诱导前列腺癌细胞系发生自噬性程序性死亡进行体外观测,并探讨其可能的分子信号通路。(2)寻找可能的靶基因,并研究VPA对靶基因SPARCL1的调节机制,以及对前列腺癌转移的抑制作用。实验方法常规培养前列腺癌细胞系PC3,DU145以及LNCaP。经过不同浓度VPA处理(0,1.2,2.5and5.0mmol/L),计算不同浓度对细胞的抑制率,电子显微镜观察细胞超微结构,免疫荧光检测自噬相关蛋白,流式细胞仪检测细胞周期,WesternBlot技术检测Akt/mTOR信号通路相关蛋白以及SPARCL1蛋白,构建SPARCL1过表达PC3细胞系,通过tranwel1细胞迁移与侵袭实验,观察SPARCL1蛋白和VPA对前列腺癌细胞转移的影响。实验结果VPA可以抑制细胞增殖,阻滞细胞周期,并且可以诱导细胞产生自噬溶酶体。不同浓度VPA处理过前列腺癌细胞之后,可以观察到自噬相关蛋白LC3-Ⅱ andBeclin-1的增加。Akt/mTOR信号通路的活性在VPA组被明显抑制,并且呈现浓度依赖性,磷酸化Akt及磷酸化mTOR随着VPA浓度的增高逐渐减少。我们还发现VPA处理组SPARCL1蛋白分泌增加,当通过过表达SPARCL1的质粒转染PC3细胞之后,过表达SPARCL1蛋白的PC3细胞在肿瘤迁移以及侵袭能力上都减弱。实验结论VPA可以诱导前列腺癌细胞发生自噬并且抑制癌细胞的增殖,迁移以及侵袭能力。这一现象及过程可能与VPA对Akt/mTOR信号通路以及SPARCL1蛋白的调控产生作用。