论文部分内容阅读
糖皮质激素(Glococorticoids，GC)的经典抗炎作用途径是通过与糖皮质激素受体(Glococorticoids receptor，GR)结合，发挥其生物学功能的。而一旦GR与GC的结合被阻断，这一过程被抑制。特发性眼眶炎性假瘤(Idiopathic Orbital Inflammatory Pseudotumor，IOIP)和米库利兹病(Mikulicz Disease，MD)均为病因不明的眼眶良性肿瘤，临床治疗通常应用GC类药物。然而实际的治疗中会有部分上述两类患者出现GC抵抗，造成IOIP和MD的GC抵抗现象的原因至今仍未有研究报道。 本研究基于临床眼肿瘤标本库的建立，从基因和蛋白水平探究了受体依赖型GC抵抗在IOIP和MD两种眼肿瘤中的机理，主要研究了可能由前炎症因子引发的p38-MAPK-P-GR-NF-κB信号通路和GRE调控的下游炎症相关基因的表达，具体的工作如下: 1.眼肿瘤标本库的建立。收集与整理术中以IOIP和MD为主的眼肿瘤组织和全血共500例，分离与提取血浆、全血DNA、组织蛋白、组织RNA等;制作石蜡切片，并依据组织类型不同分别制作了IOIP和MD的组织芯片，为后续相关研究奠定基础。 2.信号通路p38-MAPK激活介导的GR依赖型GC抵抗。结合课题组前期研究发现，对IOIP和MD样品中MIF可能引发的p38-MAPK信号通路进行了研究。Western Blot与免疫组化结果显示MIF在两实验组蛋白水平高表达，炎症相关蛋白p38在IOIP和MD中处于活化状态;免疫组化结果显示，p-p38多表达于泪腺上皮细胞和滤泡内B细胞，提示p38-MAPK在该两类疾病中的激活可能存在组织特异性;进一步利用Western Blot方法检测到P-GR受体蛋白的高表达，并用免疫荧光化学的检测验证了这一结果。p38-MAPK下游蛋白Annexin在两实验组的表达量均显著高于对照组(P＜0.01);芯片组化结果显示，下游炎症相关通路NF-κB中p65、p50两个单体蛋白在两组中均为胞核强阳性表达，提示该通路的激活。 3.GR依赖型GC抵抗差异基因的研究。基于Microarray技术，验证了IOIP和MD组DEGs在p38-MAPK和NF-κB信号通路中的表达。依据GO和KEGG富集分析，GR相关基因在两类疾病中主要富集于细胞凋亡、肽基-氨基酸修饰、多种生物体的细胞过程等过程，并主要涉及癌症相关信号通路等。因此，GC抵抗可能造成疾病的炎症反应、细胞增殖水平、癌症转化能力等的进一步升高，部分基因可能在调控下游增殖、凋亡等过程中发挥重要作用。 综上所述，IOIP和MD中的GC抵抗有可能由于MIF等因子激活了p38-MAPK信号通路，导致游离的GR磷酸化，从而无法与GC正常结合。NF-κB、Annexin等炎症通路的持续性激活，又进一步促进了GC抵抗的发生。以上过程共同导致GR调控的一系列基因的表达，产生GC抵抗的效应。本研究可能为预测.IOIP、MD病等眼肿瘤患者GC敏感性提供线索，并为GC治疗提供更多的潜在的药物靶点。研究结果具有一定的实验研究意义和临床应用价值。