【摘 要】
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目的:在我国胃癌发病率位居恶性肿瘤的第2位,死亡率位居第3位。目前我国胃癌的主要治疗方法为手术、化疗、放疗等,但5年生存率仍旧很低,近年来,中医药在治疗肿瘤方面已经取得了相当大的成就,中医药抗肿瘤的基础研究已经从细胞水平发展到了分子及基因水平;并在胃癌的预防与治疗方面展现了独特的优势。课题组前期通过体外实验验证中药复方养正散结汤能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡;上调胃癌细胞中mi R-7表达,
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目的:在我国胃癌发病率位居恶性肿瘤的第2位,死亡率位居第3位。目前我国胃癌的主要治疗方法为手术、化疗、放疗等,但5年生存率仍旧很低,近年来,中医药在治疗肿瘤方面已经取得了相当大的成就,中医药抗肿瘤的基础研究已经从细胞水平发展到了分子及基因水平;并在胃癌的预防与治疗方面展现了独特的优势。课题组前期通过体外实验验证中药复方养正散结汤能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡;上调胃癌细胞中mi R-7表达,下调EGFR表达。本研究在此基础上,进一步通过体内实验验证养正散结汤的抑癌作用及其作用机制。方法:1.构建裸鼠胃癌移植瘤模型,分别以卡莫氟、养正散结汤、生理盐水干预,测量给药期间肿瘤体积及肿瘤重量检测养正散结汤对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用。2.免疫组化法检测裸鼠胃癌移植瘤中Ki-67表达情况,计算移植瘤增殖率,检验养正散结汤对裸鼠胃癌移植瘤增殖的影响;TUNEL法检测胃癌移植瘤中细胞凋亡情况,计算凋亡率,检验养正散结汤对裸鼠胃癌移植瘤凋亡情况的影响。3.原位杂交检测裸鼠胃癌移植瘤中mi R-7表达情况,免疫组化法检测裸鼠胃癌移植瘤中EGFR表达情况,验证养正散结汤体内对于mi R-7/EGFR的作用。4.蛋白印迹实验检测裸鼠胃癌移植瘤中ERK磷酸化水平,验证养正散结汤对于EGFR下游信号通路的影响。结果:1.裸鼠移植瘤经养正散结汤干预后其生长明显受到抑制（P<0.01）,各组抑瘤率分别为:阳性对照组68.28%,中药低剂量组50.38%,中药中剂量组61.29%,中药高剂量组51.08%。2.Ki-67检测结果表明养正散结汤可明显抑制胃癌细胞增殖（P<0.01）,各组移植瘤增殖率分别为阳性对照组38.48%、中药低剂量组56.30%、中药中剂量组49.27%、中药高剂量组55.30%、阴性对照组76.27%;TUNEL凋亡检测结果表明养正散结汤可明显诱导胃癌细胞凋亡（P<0.01）,各组移植瘤凋亡率分别为:阳性对照组35.04%、中药低剂量组30.56%、中药中剂量组40.16%、中药高剂量组38.68%、阴性对照组2.12%。3.原位杂交检测结果表明裸鼠胃癌移植瘤经养正散结汤干预后其mi R-7表达明显升高（P<0.01）,各组mi R-7表达平均光密度为阳性对照组0.163、中药低剂量组0.095、中药中剂量组0.126、中药高剂量组0.108、阴性对照组0.041;免疫组化检测结果显示养正散结汤可明显抑制裸鼠胃癌移植瘤中EGFR的表达（P<0.01）,经检测各组EGFR表达的平均光密度分别为阳性对照组0.036、中药低剂量组0.119、中药中剂量组0.081、中药高剂量组0.089、阴性对照组0.169。4.蛋白印迹实验检测裸鼠胃癌移植瘤中ERK及其磷酸化水平,结果显示经养正散结汤干预后裸鼠胃癌移植瘤中ERK磷酸化水平明显下降（P<0.01）。结论:养正散结汤能明显抑制胃癌移植瘤生长,并且能抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡;养正散结汤发挥抑癌作用的机制可能与其上调mi R-7表达、下调其靶基因EGFR表达,抑制EGFR下游ERK信号通路有关。
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