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本研究拟采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)和流式细胞分析方法检测大肠癌组织和正常组织中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-relatedapoptosisinducingligand，TRAIL)、DR4和DR5的表达情况，分析其表达与大肠癌生物学行为之间的关系，从而为大肠癌治疗提供依据。
研究方法：
1.病例：选取河北医科大学第二医院2003年1月～2004年8月外科手术切除并经病理诊断确诊的大肠癌标本41例。按照2000年WHO新的大肠肿瘤组织学分级标准分类，高分化腺癌(Ⅰ级)10例，中度分化腺癌(Ⅱ级)15例，低分化腺癌(Ⅲ级)16例。有淋巴结转移者22例，无淋巴结转移者19例。另取9例癌旁组织，经病理证实为正常大肠粘膜的组织作为对照。
2.免疫组化染色及结果判定：采用免疫组化SP法对大肠癌和癌旁正常组织中TRAIL、DR4和DR5的表达进行研究。三者表达定位于细胞膜和细胞浆，阳性信号呈棕黄色颗粒状。根据染色深浅分为三个等级，分别记分1，2，3。再根据染色范围记分1，2，3。两项记分相加，＜3分为阴性表达，≥3分为阳性表达。分别计算大肠癌组织和正常组织的阳性表达率。
3.流式细胞分析。石蜡切片，利用网搓法进行单细胞悬液制备。荧光标记细胞后，采用美国BeckmanCoulter公司生产的Epics-XLⅡ型流式细胞仪上机检测，应用Expo32ADC进行免疫荧光数据分析。以荧光指数(FI)表示蛋白表达的相对含量。
4.统计学处理：应用SPSS11.0统计软件包对实验结果进行x2检验、t检验、直线相关分析。
研究结果：
1.TRAIL蛋白免疫组化染色定位于细胞膜和细胞浆，癌组织中阳性表达率为24.4％，在正常组织中阳性表达率为66.7％，流式细胞分析该蛋白表达量，癌组织平均荧光指数为0.92±0.09，正常组织平均荧光指数为1.05±0.12。癌组织中TRAIL蛋白在免疫组化中的阳性表达率和流式细胞分析的蛋白表达量均低于正常组织(P＜0.05)。癌组织中，TRAIL蛋白表达随着分化程度的降低呈逐步下降趋势(P＜0.05)；在淋巴结转移组的表达和无淋巴结转移组的表达无统计学差异(P＞0.05)。
2.DR4蛋白免疫组化染色定位于细胞膜和细胞浆，癌组织中阳性表达率为65.85％，在正常组织中阳性表达率为22.2％，流式细胞分析该蛋白表达量，癌组织平均荧光指数为1.17±0.11，正常组织平均荧光指数为1.00±0.13。癌组织中DR4蛋白在免疫组化中的阳性表达率和流式细胞分析的蛋白表达量均高于正常组织(P＜0.05)。癌组织中，DR4蛋白表达与分化程度的高低无统计学差异(P＞0.05)；在淋巴结转移组的表达和无淋巴结转移组表达无统计学差异(P＞0.05)。
3.DR5蛋白免疫组化染色定位于细胞膜和细胞浆，癌组织中阳性表达率为73.17％，在正常组织中阳性表达率为22.2％，流式细胞分析该蛋白表达量，癌组织平均荧光指数为1.12±0.12，正常组织平均荧光指数为0.98±0.12。癌组织中DR5蛋白在免疫组化中的阳性表达率和流式细胞分析的蛋白表达量均高于正常组织(P＜0.05)。癌组织中，DR5蛋白表达与分化程度无统计学差异(P＞0.05)；在淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组(P＜0.05)。
4.TRAIL与DR4蛋白表达量进行直线相关分析，r=0.33，P＞0.05。
5.TRAIL与DR5蛋白表达量进行直线相关分析，r=0.05，P＞0.05。6DR4与DR5蛋白表达量进行直线相关分析，r=0.49，P＞0.05。
研究结论：
1.TRAIL在正常组织的表达明显高于大肠癌组织，在不同组织学分级的癌组织中TRAIL蛋白的表达有统计学差异，淋巴结转移与否的癌组织中TRAIL的表达无统计学差异。
2.DR4在大肠癌组织的表达明显高于正常组织，在不同组织学分级的癌组织中DR4蛋白的表达无统计学差异，淋巴结转移与否的癌组织中DR4的表达亦无统计学差异。
3.DR5在大肠癌组织的表达明显高于正常组织，在不同组织学分级的癌组织中DR5蛋白的表达无统计学差异，淋巴结转移与否的癌组织中DR5的表达有统计学差异。
4.大肠癌组织中TRAIL、DR4和DR5的表达量三者之间均无直线相关关系。