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背景:胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,其致死率高居常见肿瘤的前三位。大部分胃癌患者被发现时通常为晚期,其中位数5年生存率不超过20%。目前,胃癌治疗的最佳方法是手术切除,并采用根治性治疗和辅助化疗或放疗。但是,胃癌的复发率仍然很高,而且预后较差。因此,进一步研究促进胃癌进展的分子机制是揭开新的诊断或预后指标的关键,同时也是改善临床结果的治疗目标。亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)与许多人类恶性肿瘤的发生和发展密切相关。诸多研究报告表明,在各种类型的癌症中LETM1的表达均明显增强,并且与不良的临床预后有着密切关系,同时也导致了较低的生存率。但是,目前尚未完全了解LETM1在胃腺癌中的临床病理学意义及其干性关系。目的:本文旨在探讨LETM1在胃腺癌组织中的表达情况及其临床病理学意义,并研究LETM1对胃腺癌干性特征的影响及其与PI3K/Akt信号通路之间的关系,进而为胃腺癌临床靶向治疗提供实验依据。方法:在本项研究中,我们应用免疫组织化学染色方法观察了 1 89例石蜡包埋的胃腺癌组织样品中LETM1的表达,分析了 LETM1与临床病理学参数、肿瘤干性相关蛋白、细胞周期,以及PI3K/Akt信号通路的关系。应用Kaplan-Meier生存分析阐述了 LETM1对胃腺癌患者预后的作用。使用蛋白质印迹法检测了胃腺癌衍生细胞系中干性相关蛋白,细胞周期相关蛋白以及PI3K/Akt信号通路蛋白的表达情况。其次采用免疫荧光技术,检测了胃腺癌衍生细胞系中LETM1以及肿瘤干性相关蛋白的表达情况。使用缺氧诱导剂二氯化钴(CoCl2)处理AGS细胞,用蛋白质印迹法检测在缺氧条件下LETM1以及干性相关蛋白的表达情况;再通过小分子干扰RNA(esiRNA)转染技术,沉默LETM1的表达并进行MKN28细胞的球体形成实验以检测其干细胞特性。此外,采用流式细胞术和迁移侵袭实验检测了细胞周期及其迁移和侵袭能力的变化;并且采用PI3K抑制剂LY294002抑制PI3K蛋白的表达后,用蛋白质印迹法检测MKN28和MKN74细胞中PI3K/Akt信号通路蛋白和LETM1的表达情况。结果:1.LETM1在原发性胃腺癌组织中的表达明显高于正常胃上皮组织以及慢性胃炎和肠上皮化生组织。LETM1的表达与胃腺癌的肿瘤分化,病理肿瘤分期,淋巴结转移,临床分期和肿瘤大体类型密切相关。Kaplan-Meier生存分析表明,LETM1阳性表达的胃腺癌患者总生存率明显低于阴性表达者。此外,LETM1的阳性表达与肿瘤微血管密度的增加密切相关。2.LETM1、CD44和LGR5等肿瘤相关干性标志物在胃腺癌细胞系MKN28,MKN74中高表达;并且在共聚焦显微镜的观察下,LETM1/CD44、LETM1/LGR5在MKN28细胞中分别呈共定位表达。在胃腺癌细胞系MKN28和MKN74中,用esiRNA介导LETM1的沉默,降低了细胞中肿瘤干性相关蛋白CD44、LGR5的表达水平。同时,沉默LETM1的表达明显抑制了 MKN28细胞的球体形成能力。3.采用CoC12诱导缺氧的条件下,随着缺氧时间延长(6h,12h)胃腺癌细胞系AGS中LETM1,CD44,LGR5和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达水平明显增加。4.LETM1与细胞周期相关蛋白cyclin D1在MKN28和MKN74细胞中呈阳性表达。同时,沉默LETM1的表达减少了 MKN28和MKN74细胞周期中S期亚群的比例,并且降低了 MKN28和MKN74细胞的侵袭和迁移能力。5.LETM1与PI3K/Akt信号通路蛋白(如pPI3K-p85和pAkt-Thr308)在胃腺癌细胞系MKN28和MKN74中高表达。PI3K抑制剂明显下调了 MKN28和MKN74细胞中LETM1,pPI3K-p85和pAkt-Thr308的表达水平。结论:1.LETM1参与胃腺癌的发生及发展过程,是判定胃腺癌进展及不良预后的生物学指标。2.LETM1调节胃腺癌细胞的CD44、LGR5的表达,与肿瘤干性特征形成密切相关。3.LETM1调节胃腺癌细胞的侵袭迁移能力及细胞周期。4.胃腺癌细胞中PI3K/Akt信号通路调节LETM1的表达。