【摘 要】
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恶性肿瘤已成为威胁人类健康的第一杀手。肿瘤生物治疗是继手术、化疗和放疗后第四种肿瘤治疗模式。本研究在载有PUMA的复制缺陷型腺病毒(Ad-PUMA)基因治疗研究的基础上,设计
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恶性肿瘤已成为威胁人类健康的第一杀手。肿瘤生物治疗是继手术、化疗和放疗后第四种肿瘤治疗模式。本研究在载有PUMA的复制缺陷型腺病毒(Ad-PUMA)基因治疗研究的基础上,设计了含有(PUMA)BH3效应序列和辅助序列TAT-DV3的融合多肽TAT-DV3-BH3用于抗肿瘤研究。细胞生长抑制实验结果表明融合多肽TAT-DV3-BH3能明显抑制结肠癌细胞、肺腺癌细胞和乳腺癌细胞的生长,对非肿瘤细胞生长没有影响;流式细胞术分析融合多肽对结肠癌细胞和人胚肾细胞0.5hr转染效率接近100%;激光共聚焦显微镜分析融合多肽能快速进入细胞内,主要分布在细胞浆中,细胞核未见分布;融合多肽依靠对肿瘤细胞凋亡诱导作用抑制细胞生长,细胞出现典型凋亡形态学特点;机制分析结果显示融合多肽经线粒体途径诱导肿瘤细胞发生凋亡。体内抑瘤实验表明融合多肽能明显抑制肿瘤生长,且对裸鼠生长没有影响;体内分布研究实验结果表明融合多肽在荷瘤裸鼠体内主要富集于肿瘤组织、代谢器官肝和肾,其它器官未见分布。总之,融合多肽TAT-DV3-BH3有明显抗肿瘤活性,表现出针对肿瘤的特异性和靶向性,未发现明显毒副作用,有着良好的研究和应用前景。同时,本研究还对与细胞周期相关的磷酸化蛋白进行了初步探讨,选择了两株结肠癌细胞用于实验:确定了UV照射后,P53在细胞中起效时间,收获了4个相关样品,并进行了分离、纯化和浓缩,得到了4个磷酸化蛋白样品,为进行质谱分析打下基础。
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