【摘 要】
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目的:探索参菇七蟾颗粒制备工艺,从吸湿率、成型率,休止角及溶化性等方面考察制粒工艺,完成质量控制。同时选用人肺腺癌细胞株A549来进行参菇七蟾颗粒治疗肺癌的初步药效学评价和机制探讨。方法:1、药剂学部分:取干蟾皮,通过水提醇沉得到华蟾素;取干燥香菇若干,进行水提醇沉提取,三氯乙酸法纯化得到香菇多糖;取三七若干,通过醇提,大孔吸附树脂分离纯化,得到三七总皂苷;采用高效液相色谱法(HPLC)对华蟾素、
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目的:探索参菇七蟾颗粒制备工艺,从吸湿率、成型率,休止角及溶化性等方面考察制粒工艺,完成质量控制。同时选用人肺腺癌细胞株A549来进行参菇七蟾颗粒治疗肺癌的初步药效学评价和机制探讨。方法:1、药剂学部分:取干蟾皮,通过水提醇沉得到华蟾素;取干燥香菇若干,进行水提醇沉提取,三氯乙酸法纯化得到香菇多糖;取三七若干,通过醇提,大孔吸附树脂分离纯化,得到三七总皂苷;采用高效液相色谱法(HPLC)对华蟾素、三七总皂苷进行定性鉴定,采用紫外分光光度法对香菇多糖进行含量测定;选取中药制剂常用辅料,以成型率,吸湿率为考察指标对其种类和用量进行筛选后,按QHF复方配比,加入人参皂苷Rg3,制成参菇七蟾颗粒剂,并完成鉴定与相关质量控制。2、药效学部分:体外实验:1)选取人肺腺癌细胞株A549,以不同浓度的参菇七蟾颗粒干预,MTT法检测参菇七蟾颗粒对人肺腺癌细胞A549的细胞增殖的影响;2)细胞划痕实验检测参菇七蟾颗粒对人肺腺癌细胞A549运动能力的影响;3)Transwell实验检测参菇七蟾颗粒对人肺腺癌细胞A549迁移与侵袭能力的影响;4)Western Blot检测参菇七蟾颗粒干预A549细胞后对EGFR信号通路的影响。结果:1、参菇七蟾颗粒剂制备及制定评价标准:根据2015年版《中国药典》四部通则(0104)规定的颗粒剂要求,药粉比为1∶2,混合辅料比(乳糖∶淀粉)为1∶1,采用85%乙醇做润湿剂制备的参菇七蟾颗粒剂,其性状、粒度、水分及溶化性各项检查均符合标准。2、1)参菇七蟾颗粒对人肺腺癌细胞A549增殖的影响:参菇七蟾颗粒对该肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用,且具有时间浓度依耐性。2)参菇七蟾颗粒对人肺腺癌细胞A549侵袭迁移能力的影响:参菇七蟾颗粒能明显抑制A549细胞侵袭迁移能力,且具有时间浓度依赖性。3)参菇七蟾颗粒对EGFR/PI3K/AKT通路的影响:参菇七蟾颗粒能明显抑制EGFR、PI3K及AKT蛋白的磷酸化。结论:(1)提取、分离纯化及鉴定了参菇七蟾颗粒剂中三种有效成分,制成参菇七蟾颗粒。(2)参菇七蟾颗粒剂最佳制备工艺为药粉:辅料=1∶2,辅料比(乳糖∶淀粉)=1∶1,润湿剂85%乙醇,此工艺条件下制得颗粒剂其粒度、水分及溶化性各项检查均符合2015版《中国药典》规定。(3)参菇七蟾颗粒剂可以抑制肺腺癌细胞A549的增殖与迁移能力,这种作用可通过抑制EGFR、PI3K及AKT蛋白的磷酸化来发挥作用。
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