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淫羊藿是一种传统中药材,主要活性成分为淫羊藿黄酮,具有壮阳、治疗骨质酥松、延缓衰老以及改善机体免疫功能、抑制肿瘤生长等显著药理活性,其有效成分具有较高的药物开发潜力。近年来淫羊藿苷的抗肿瘤研究表明,其可以通过提升机体的主动或被动免疫能力,从而激活机体自身免疫系统来杀伤肿瘤细胞,是一类很有潜力的天然小分子抗癌药物。目前临床上使用的肿瘤免疫药物以生物大分子为主,尚未见小分子药物的报道。与蛋白多肽类药物相比,小分子药物肿瘤免疫是近年来广受关注的新的肿瘤治疗方法更稳定不易降解,价廉,不易引起过敏反应。因此,开发能够用于肿瘤免疫治疗的小分子药物具有较高研究价值。淫羊藿次苷Ⅱ是淫羊藿中含量较低的一种黄酮组分,本课题组前期研究发现淫羊藿次苷Ⅱ能刺激人体细胞产生γ-干扰素（interferon-γ,IFN-γ）。淫羊藿次苷Ⅱ与目前已进入临床三期试验的抗肝癌新药—阿可拉定（icaritin,ICT）的分子结构相比,仅仅是多了一个鼠李糖基,而淫羊藿次苷Ⅱ的水溶性更好,生物利用度更高。因此本论文基于前期工作考察了淫羊藿次苷Ⅱ的抗肿瘤作用,并对其分子机制进行研究。本论文工作如下:1.淫羊藿次苷Ⅱ在C57BL/6J荷瘤小鼠体内的抗肿瘤活性研究。在实验室前期研究基础上,首先通过上下法评价了淫羊藿次苷Ⅱ的安全性,结果表明淫羊藿次苷Ⅱ的半数致死剂量(LD50)大于2000 mg/kg,安全性很高。然后通过移植瘤实验探究了淫羊藿次苷Ⅱ的体内抑瘤活性,结果表明淫羊藿次苷Ⅱ在S180及H22荷瘤小鼠体内均具有明显的肿瘤抑制作用,且通过促进机体产生IFN-γ来抑制肿瘤的生长。解剖实验表明淫羊藿次苷Ⅱ提高了胸腺指数和脾重指数,具有改善荷瘤小鼠免疫功能的作用。2.淫羊藿次苷Ⅱ在细胞水平上的活性评价。首先用CCK8法研究淫羊藿次苷Ⅱ在与T细胞混合培养的条件下对肝癌细胞的增殖抑制效果,结果表明淫羊藿次苷Ⅱ能够明显抑制肝癌细胞的增殖。进而利用ELISA法检测淫羊藿次苷Ⅱ对T细胞分泌IFN-γ的影响,结果显示淫羊藿次苷Ⅱ能够显著促进T细胞分泌IFN-γ,进一步证实了淫羊藿次苷Ⅱ是通过免疫系统发挥抗肿瘤作用的。3.淫羊藿次苷Ⅱ在细胞水平上的抗肿瘤作用机制探究。采用了Western blot、CCK8、流式分析等实验方法探究了淫羊藿次苷Ⅱ在细胞水平上的抗肿瘤作用机制,结果表明淫羊藿次苷Ⅱ促进了T细胞分泌IFN-γ,使IFN-γ与细胞表面的IFN-γ受体结合后激活了JAK1/STA1通路,提高了IFN-γ介导的凋亡通路中关键蛋白Noxa、Cytochrome C、cleaved PARP、cleaved Caspase 3、cleaved Caspase 9的表达水平,抑制了抗氧化蛋白HO-1的表达,进而增加细胞内ROS堆积并导致线粒体膜电位的损失,最终导致肝癌细胞死亡。以上对淫羊藿次苷Ⅱ的体内抗肿瘤活性及其作用机制的研究,对于新型天然小分子抗癌药物的开发具有重要的科学意义和应用价值,并为淫羊藿及其主要活性成分的肿瘤免疫治疗临床研究提供依据。