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为了探讨海洋蛋白质酶解产物作为日粮蛋白质原料、以期减少日粮中鱼粉用量的可行性。本文以黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)为研究对象,在室外池塘网箱中进行养殖试验,研究鳀鱼自溶鱼浆、金枪鱼酶解鱼溶浆对黄颡鱼生长性能和生理健康的影响,并在此基础上探讨酶解产物(小肽、游离氨基酸)对黄颡鱼蛋白质代谢过程的影响。本文的研究内容和主要研究结果如下:1.鳀鱼浆自溶过程中营养成分的变化本试验在55℃下设置自溶(C)、抗生素(A)、外源木瓜蛋白酶(E)、抗生素和木瓜蛋白酶(E+A)4个试验组,以游离氨基酸、生物胺、脂肪酸等为指标,探讨鳀鱼自溶过程中营养成分的变化规律,分析制备自溶鱼浆的可行性。结果显示:55℃下,以α-氨基氮含量、细菌总数为评价指标,鳀鱼的自溶时间不宜超过9h。自溶完成后,各试验组游离氨基酸、挥发性盐基氮、尸胺含量升高显著(P<0.05),游离氨基酸含量达15 g/100g(干物质);组胺、腐胺、精胺、亚精胺含量不同程度降低。不饱和脂肪酸部分转化为饱和脂肪酸,酸价、丙二醛、过氧化值与原料鱼差别不大。结果表明在55℃下鳀鱼蛋白质自溶迅速,水解产物生成率高,油脂氧化程度低;自溶时间控制在9 h内,外源木瓜蛋白酶、微生物对自溶过程影响较小。2.鳀鱼自溶鱼浆对黄颡鱼生长、健康的影响本试验的目的是探讨鳀鱼自溶鱼浆对黄颡鱼生长性能、生理健康的影响。以30%鳀鱼粉为对照(FM),(1)在相同配方模式下,以6%鳀鱼浆(干物质)部分替代鱼粉(MPH6);(2)在无鱼粉日粮中分别添加3%(FPH3)、6%(FPH6)、12%(FPH12)鳀鱼浆(干物质);共设计5组等氮等能日粮,在池塘网箱中养殖黄颡鱼[初始体质量(30.08±0.35)g]60 d。结果显示:与FM组相比,FPH12组的SGR、FCR无显著差异,而MPH6、FPH3、FPH6组SGR降低了15.45%~24.39%,FCR升高了32.14%~42.86%。各组间全鱼水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分差异不显著(P>0.05)。FPH3、FPH6、FPH12组黄颡鱼肌肉多种游离氨基酸水平显著高于FM组(P<0.05),Met、Lys与日粮中的游离水平显著相关(P<0.05)。各试验组血清AST、ALT、HDL、LDL、TP、CHOL、TG无显著差异(P>0.05),FPH3组ALB显著低于FM(P<0.05)。高组胺日粮组(FM、MPH6)黄颡鱼胃黏膜细胞出现明显损伤。研究表明:无鱼粉日粮中添加12%鳀鱼自溶鱼浆(干物质),以植物蛋白为补充蛋白源,黄颡鱼生长速度、日粮效率和血清生理指标与30%鱼粉具有一定的等效性,还避免了高组胺含量对胃部的损伤作用;自溶鱼浆可改变黄颡鱼肌肉游离氨基酸组成,增加呈味氨基酸含量。3.金枪鱼酶解鱼溶浆(粉)对黄颡鱼生长、健康的影响为了探讨金枪鱼鱼溶浆(SW)、酶解鱼溶浆(HSW)、酶解鱼溶浆粉(HSM)对黄颡鱼生长性能、生理健康的影响,以30%鳀鱼粉为对照(FM),在无鱼粉日粮中按照FM组鱼粉蛋白质含量的25%、50%、75%分别添加SW(SW25、SW50、SW75)、HSW(HSW25、HSW50、HSW75)、HSM(HSM25、HSM50、HSM75),设计10组等氮等能日粮,在池塘网箱中养殖黄颡鱼[初始体重(15.67±0.11)]g 60 d。结果显示:添加8%~16%的HSW、HSM(干物质),黄颡鱼SGR与FM组无显著差异,添加8%~24%的SW,黄颡鱼SGR降低18.62%~43.09%(P<0.05)。SW、HSW、HSM的添加量增加,SGR降低,SW、HSM变化显著(P<0.05)。与FM组相比,各组全鱼、肝胰脏蛋白质、灰分含量无显著差异(P>0.05),而SW75组全鱼、肝胰脏脂肪含量显著低于FM、HSW25(P<0.05)。各试验组AST、ALT、HDL、LDL、TP、ALB、GLU、TG无显著差异;SW、HSW、HSM处理血清T-Bil水平低于FM组,并随添加量增加呈上升趋势。结果表明:HSW最符合黄颡鱼营养需求,无鱼粉日粮中添加约8%的HSW,以植物蛋白为补充蛋白源,黄颡鱼生长速度、日粮效率、血清生理指标与30%鱼粉具有一定的等效性;酶解鱼溶浆(粉)的添加量从8%升到24%,黄颡鱼生长速度、日粮效率降低。4.鱼溶浆酶解程度对黄颡鱼生长、健康的影响本试验的目的是探讨鱼溶浆酶解程度对黄颡鱼生长性能、生理健康的影响。以金枪鱼鱼溶浆为原料,制备三种小肽、游离氨基酸含量不同的酶解鱼溶浆(L-HSW、M-HSW、H-HSW)。以28%鳀鱼粉为对照(FM),在无鱼粉日粮中按照FM组鱼粉蛋白质含量的15%、30%、45%分别添加L-HSW(L-HSW15、L-HSW30、L-HSW45)、M-HSW(M-HSW15、M-HSW30、M-HSW45)、H-HSW(H-HSW15、H-HSW30、H-HSW45),设计10组等氮等能日粮,在池塘网箱中养殖黄颡鱼[初始体重(18.67±0.11)]g 60 d。结果显示:添加8%的L-HSW和M-HSW(干物质),黄颡鱼SGR与FM组差异不显著;添加4%~12%的H-HSW,SGR降低,H-HSW45组比FM组低23.08%(P<0.05)。与FM组相比,各组全鱼、肝胰脏蛋白质、灰分含量无显著差异(P>0.05),而M-HSW15组全鱼、肝胰脏脂肪含量显著低于FM组(P<0.05)。与FM组相比,各组的CHOL,L-HSW15、H-HSW15组的TP、ALB及L-HSW30组的HDL显著降低(P<0.05),T-Bil、AST、ALT、GLU、TG无显著差异(P>0.05)。结果表明:M-HSW最符合黄颡鱼营养需求,无鱼粉日粮中添加8%的M-HSW(干物质),以植物蛋白为补充蛋白源,,黄颡鱼生长速度、血清生理指标与28%鱼粉有一定的等效性;酶解鱼溶浆添加量过高或酶解过度,黄颡鱼生长速度、日粮效率降低。5.黄颡鱼肠道中Pep T1对蛋白质的吸收调控作用本试验的目的是探讨酶解鱼溶浆对黄颡鱼蛋白质吸收的影响。首先,克隆得到黄颡鱼Pep T1 m RNA的核心片段,然后根据Pep T1 m RNA组织差异性表达结果,分析肠道Pep T1 m RNA在不同处理的相对表达结果。结果显示:Pep T1主要在黄颡鱼前肠表达,m RNA表达量分别是中肠、后肠的1.36、5.03倍。SW、HSW、HSM添加量约8%时,黄颡鱼前肠Pep T1 m RNA表达量显著上调(P<0.05);添加量为12%~24%时,表达量显著下调(P<0.05)。摄食SW日粮的黄颡鱼血清游离氨基酸显著高于FM组(P<0.05);而摄食L-HSW、M-HSW、H-HSW日粮的黄颡鱼血清游离氨基酸随添加量增加呈现上升趋势。结果表明:黄颡鱼可通过调控肠道Pep T1表达影响蛋白质的吸收,添加8%的酶解鱼溶浆,Pep T1 m RNA的表达量上调,促进肠道蛋白质的吸收;添加量超过12%,血清游离氨基酸水平升高,黄颡鱼下调Pep T1的表达量降低肠道对二/三肽、甚至游离氨基酸的吸收过程,这可能是导致黄颡鱼生长降低的主要原因。