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病原菌对抗生素产生耐药性是我国乃至全球面临的严峻挑战之一,寻找能有效抑制抗药菌的抗生素是解决这一问题的根本途径。达托霉素(Daptomycin,LY146032)是第一个被美国FDA批准上市的脂肽类抗生素,能杀死临床上分离的绝大多数革兰阳性菌,包括厌氧菌、肠球菌等耐药菌,具有广阔的应用前景。提高达托霉素的生产性能,实现该产品的市场化,具有重要的科学意义和经济效益。本文以筛选高产菌株和优化发酵条件为主要目的,对生产菌种的选育、摇瓶及3 L发酵罐分批发酵工艺进行了系统研究,并取得以下结论:1.本文对野生型菌株进行了筛选,即采用紫外诱变选育了自身代谢产物达托霉素抗性、前体癸酸抗性的达托霉素突变菌株。最终筛选出一株达托霉素突变株LC-C-58,该菌株的达托霉素产量是121.0 mg/L,并且传代性能稳定。2.初步确定3 L发酵工艺条件:以1%的接种量将种子接种于装有1.8 L发酵培养基的3 L NBS发酵罐中,温度控制30℃,通气量控制0.8 v/v/m,流加消泡剂进行消泡,pH控制(0~30 h,pH 6.5;30 h~96 h,pH 7.0),溶氧(12~45 h,40%;45 h~96 h,30%)。3.确定癸酸与油酸甲酯按1:1体积比配制,在发酵25h时开始流加,并且流加的速度是0.1 mL/h,为最佳前体流加方案。4.确定种子培养基:葡萄糖2.0%,葡萄糖酸钙0.2%,黄豆饼粉2.0%,酵母膏0.1%,KCl 0.02%,MgSO4·7H2O 0.02%,FeSO4·7H2O 0.0004%,Sag471消泡剂0.02%,蒸馏水95.6396%。发酵培养基:黄豆饼粉2.2%,Fe2(NH4)3SO4 0.066%,葡萄糖0.825%,Sag471消泡剂0.022%,土豆糊精3.3%,糖蜜0.275%,蒸馏水93.312%。5.研究间歇补料和连续补料对发酵的影响,连续补料优于间歇补料。在第36 h开始以0.5 mL/h的速度向发酵罐中流加甘油,最终实现连续补料分批发酵可以达到130.02 mg/L。