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目的1.探讨加味丹参饮联合BMSCs移植对IRI大鼠心肌细胞的保护作用。2.初步探讨加味丹参饮对BMSCs定向分化的体内诱导作用。3.探讨加味丹参饮联合BMSCs移植介导p38MAPK通路发挥心肌缺血再灌注损伤保护效应的作用机制。方法1.采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法进行BMSCs分离、培养。2.采用大鼠缺血再灌注损伤模型,310只雄性SD大鼠随机分为5组：A组：假手术组；B组：模型组；C组：干细胞移植组(BMSCs组)：D组：加味丹参饮小剂量(等效剂量)+干细胞移植组；E组：加味丹参饮组大剂量(4倍等效剂量)+干细胞移植组。分别于再灌注3d、7d和14d三个时相点进行观察。观察大鼠心肌酶学的变化、免疫组化法检测心肌间质I,III型胶原沉积及Desmin蛋白表达,透射电子显微镜观察心肌细胞超微结构。3.放射免疫法检测大鼠血清TGF-β1,水平、PCR法检测大鼠心肌组织p38MAPK mRNA的表达；Western-blot法检测大鼠心肌组织p38MAPK蛋白的表达。结果1.光镜下观察P3细胞大部分为梭形、多角形或纤维状排列,形态较为一致,呈“漩涡”样生长,应用FACScan流式细胞仪检查细胞均一性较好,纯度较高,符合实验要求。2.左冠状动脉血流阻断后,心电图II导联可见ST段明显上抬,T波高耸；再灌注后,心电图出现病理性Q波,部分动物出现室性心律失常；随着再灌注时间的延长,ST段下移,但病理性Q波继续加深。3.各造模组血清心肌酶学水平随时间推移逐渐降低。再灌注第3天,与A组比较,各造模组血清心肌酶水平均显著升高,差异有显著性(P<0.01)。与B组相比,C组、D组、E组血清心肌酶相对降低,差异有显著性(P<0.05)。再灌注第7天、14天,C组、D组、E组血清心肌酶水平均显著低于B组,差异有显著性(P<0.01)。4.免疫组化结果显示,再灌注第3天,与A组比较,各组心肌间质Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均增强,但Ⅰ胶原表达差异均无显著性(P>0.05),Ⅲ型胶原表达差异有显著性(P<0.05)。再灌注第7天,各模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原IOD均有升高,与A组比较,差异有显著性(P<0.01＆P<0.05),C组、D组、E组Ⅲ型胶原IOD与B组比较,差异有统计学意义(P<0.01&P<0.05)；Ⅰ型胶原IOD组间比较,仅D组与B组差异有显著性(P<0.05)。且与第3天比较,B组、C组升高显著,差异有统计学意义(P<0.01&P<0.05)。再灌注14天,B组1OD值较前继续升高,其余各组IOD较第7天有所下降,与B组及C组比较,D组、E组IOD值降低,差异有显著性(P<0.01＆P<0.05)。5.免疫组化结果显示,再灌注第3天,与A组比较,各模型组Desmin蛋白表达均有降低,差异有统计学意义(P<0.01)。再灌注7天、第14天,B组IOD值逐渐下降,但差异无显著性,C组、D组、E组IOD值逐渐升高,其中D组再灌注14天与再灌注3天比较,差异有显著性(P<0.05)；再灌注7天,各模型组与A组比较,IOD值降低,差异有显著性(P<0.05&P<0.01),而D组、E组与B组比较,差异有显著性(P<0.05)；再灌注14天,B组、C组IOD值仍显著低于A组,差异有显著性(P<0.01&P<0.05),C组、D组、E组IOD值高于B组,差异有显著性((P<0.01&P<0.05),其中D组IOD值高于C组,差异有显著性(P<0.05)。6.电镜下观察大鼠心肌细胞超微结构,可见B组心肌细胞损伤最为严重,C组次之,D组及E组均随着时相点的推移,心肌细胞逐渐修复,以D组疗效相对更好,但与E组比较,差别亦不显著。7.采用放射免疫法检测大鼠血清TGF-β1,结果显示,再灌注第3天,与A组比较,B组与C组水平降低,B组与之差异有统计学意义(P<0.05),而D组、E组与A组比较则水平升高,差异有显著性(P<0.01)。再灌注7天,B组与C组TGF-β1水平较前升高,与再灌注3天比较,差异有显著性(P<0.05),而D组及E组TGF-β1水平则开始下降,与再灌注3天比较,差异无显著性。再灌注14天,B组TGF-β1水平继续升高,与再灌注7天比较,差异有统计学意义(P<0.05)；而D组TGF-β1水平则继续下降,与再灌注7天比较,差异有显著性(P<0.05)。8.采用PCR法检测p38MAPK mRNA的表达。D组、E组2-△Ct值再灌注3天、再灌注7天均显著增高,与其他组比较,差异有显著性(P<0.01)；E组升高幅度更为显著,与D组比较,差异有显著性(P<0.01)；再灌注14天,D组、E组2-△Ct值较前有所下降,但仍高于其他各组,差异有显著性(P<0.01&P<0.05)。结论1.加味丹参饮联合干细胞移植能降低IRI大鼠心肌酶、改善其心肌细胞超微结构、延缓心肌纤维化,对心肌缺血再灌注损伤有确切的保护作用,随时间的延长,保护作用稳定、持续。但大、小剂量之间疗效无显著性差异。2.加味丹参饮可促进坏死心肌组织心肌特异性蛋白的表达,提示加味丹参饮可诱导BMSCs向,心月几样细胞转化。3.加味丹参饮对IRI大鼠心肌细胞的保护机制可能与调控TGF-β1和p38MAPK活性有关。