活血通腑方抗实验性腹腔粘连及细胞分子机制研究

• 作 者: 徐庆
• 机 构: 南京中医药大学
• 出 处: 南京中医药大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 活血通腑方 腹腔粘连 细胞分子 体外培养

目的：确立活血通腑方最优处方及最佳剂量；建立简便有效的腹膜间皮细胞体外培养方法。探讨活血通腑方优选处方对腹膜间皮细胞的影响。为临床治疗提供切实有效的治法和方药，开发安全、有效、可靠的新药做好基础性研究工作。　　
方法：1、以锉刀法制备大鼠腹腔粘连模型，运用正交T值法设计对原活血通腑方药进行优选，通过主药分析、辅药交互作用分析和剂量分析，以粘连程度为主要指标，结合病理，确定活血通腑方治疗腹腔粘连的最优处方及最佳剂量。2、制备活血通腑方优选处方药物血清。3、分离培养大鼠腹膜间皮细胞。用0.25％胰蛋白酶-0.016％EDTA Na2细胞消化液消化大鼠腹膜组织，细胞悬液经100目筛网滤过后进行培养。用形态学，免疫组化法，透射电镜鉴定细胞。4、TNF-α加入PMCs培养24h，加入含药血清培养24h。5.ELISA法测定细胞培养液中转化生长因子β1、纤连蛋白、结缔组织生长因子蛋白含量，分活血通腑方优选处方组和空白对照组。　　
结果：1.肉眼和病理观察均表明主药(大黄、桃仁、芒硝、红花)具有抗腹腔粘连作用，元胡和莱菔子具有协同作用，三棱和莪术均明显协同或拮抗作用，综合分析初步认为，活血通腑方最佳组合为大黄、桃仁、芒硝、红花、元胡、莱菔子六味药。2.综合肉眼观察和病理组织学检查评分结果，以药物疗效为优先，兼顾药材经济性原则，拟定：大黄10g、桃仁10g、芒硝10g、莱服子10g、红花5g、元胡10g为最佳剂量配比。3.分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石样。电镜下可见丰富的微绒毛和内质网。免疫组化鉴定显示波形蛋白表面抗原阳性，第8因子抗体，CD45抗体阴性。大鼠腹膜间皮细胞培养成功，该模型可为进一步研究腹腔粘连的防治提供实验基础。4.活血通腑方优选处方能通过调节术后转化生长因子(TGF)β1、纤连蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白含量水平影响术后的纤溶机制及粘连程度，防治大鼠术后腹腔粘连的发生。　　
结论：活血通腑方优选处方能减轻腹腔粘连，影响TGF-β1、FN、CTGF蛋白含量，是防治腹腔粘连的有效方。