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卵巢低反应是导致大龄女性IVF结局不良的重要原因，而中医药治疗不孕不育历史悠久，疗效显著。中医药在辅助生殖领域中具有极大的应用前景，其疗效及机制研究尚处于起步阶段。 目的:评价齐氏补肾健脾方在自然衰老小鼠模型中对其卵巢低反应的疗效，并进一步探索其作用机制。 方法:将90只自然衰老的9月龄C57BL/6J雌性小鼠随机分为老年对照组、DHEA组，补肾健脾（高剂量）组、补肾健脾（低剂量）组，给予相应的处理;并以青年小鼠为正常对照。通过对各组小鼠的生殖表现，血清A删水平，FSH水平评价齐氏补肾健脾方对自然衰老小鼠生殖能力的影响;通过对控制行促排卵(COS)结果的观察来评价齐氏补肾健脾方对自然衰老小鼠IVF中卵巢反应性的影响;通过对体外受精结果的观察来评价齐氏补肾健脾方对自然衰老小鼠IVF中卵子和胚胎质量的影响。同时，我们通过卵巢HE染色及卵泡计数的方法，评估齐氏补肾健脾方对小鼠卵泡发育的影响，并通过免疫荧光染色评价卵子的质量。此外，为了进一步揭示齐氏补肾健脾方的作用机制，我们通过实时PCR及免疫荧光染色的方法，检测了NOBOX，GDF-9和BMP-15在基因和蛋白水平上的表达。 结果: 1.齐氏补肾健脾方对自然衰老模型小鼠的生殖表现的影响 在本研究中，补肾健脾（高剂量）组小鼠的发情周期中发情前期和发情期的比例及产仔数量均较老年对照组有增高趋势，但是无统计学差异(P＞0.05)。同时发现补肾健脾（高剂量）组小鼠血清AMH水平较其他自然衰老小鼠增高(P＜0.05)。 2.齐氏补肾健脾方有助于提高自然衰老小鼠促排卵中卵巢反应性及卵子和胚胎质量 本研究中，补肾健脾（高剂量）组小鼠在COS和IVF中获卵数，MⅡ卵子数，受精卵数及形成的囊胚数量均较老年对照组增多，且有统计学差异(P＜0.05)。其他各组自然衰老小鼠COS及IVF结果无统计学差异。在显微镜下对各组小鼠卵子及受精卵的形态观察中，我们发现补肾健脾（高剂量）组小鼠卵子形态较老年对照组，DHEA组及补肾健脾（低剂量）组形态规则，第一极体排出的卵子比例较高，卵子自发崩解或死亡的较其他自然衰老小鼠减少。免疫荧光染色后在显微镜下观察发现补肾健脾（高剂量）组小鼠卵子纺锤体纺锤体结构虽较青年组小鼠卵母细胞纺锤体疏松，染色体DAPI染色荧光强度较青年组减弱，但是较其他自然衰老小鼠纺锤体形态结构仍有明显改善。提示齐氏补肾健脾方可有助于提高自然衰老小鼠的卵巢反应性，卵子质量及胚胎质量。 3.齐氏补肾健脾方有助于提高自然衰老小鼠卵泡发育效率 卵泡计数结果显示补肾健脾（高剂量）组小鼠卵巢中原始卵泡，初级卵泡，次级卵泡及窦卵泡的数量较老年对照组小鼠增高，且有统计学差异(P＜0.05)。提示齐氏补肾健脾方提高了自然衰老小鼠的卵泡发育的效率，提高自然衰老小鼠的卵泡池规模，从而有助于改善自然衰老小鼠IVF中的卵巢反应性。此外，DHEA组小鼠初级卵泡数量较其他自然衰老小鼠增多，且有统计学差异(P＜0.05)，提示DHEA有助于促进原始卵泡的激活发育，但是DHEA组的原始，次级卵泡和窦卵泡数量较老年对照组并无差异(P＞0.05)，提示DHEA无法最终改善卵泡的发育。 4.齐氏补肾健脾方对自然衰老小鼠NOBOX转录因子及卵源性生长因子GDF-9和BMP-15表达的影响 在本研究中，我们在基因水平和蛋白水平检测了NOBOX转录因子的表达情况。real-time PCR结果提示补肾健脾（高剂量）组小鼠卵巢中Nobox基因表达较老年对照组增多，且有统计学差异(P＜0.05)。同时通过免疫荧光染色结果观察，同时采用Image J软件分析荧光照片的IOD值，对NOBOX蛋白进行半定量分析发现:补肾健脾（高剂量）及补肾健脾（低剂量）组卵巢中NOBOX蛋白表达较老年对照组增加，有统计学差异(P＜0.05)。这一点与本实验中Nobox基因在卵巢中表达的改变趋势是一致的。提示齐氏补肾健脾方提高了自然衰老小鼠卵巢中NOBOX转录因子的表达。此外，real-time PCR提示补肾健脾（高剂量）组卵巢中GDF-9mRNA的表达虽较老年对照组有增加的趋势，但是无统计学差异(P=0.1002);免疫荧光染色结果观察结果分析提示中药补肾健脾（高剂量）组小鼠卵巢中GDF-9蛋白的表达较其他各组12月龄的自然衰老小鼠有增多的趋势，但是无统计学差异(P＞0.05)，该结果与GDF-9mRNA的检测结果是一致的。BMP-15无论是基因水平还是蛋白水平在各组自然衰老小鼠中均无统计学差异(P＞0.05)。 结论: 1齐氏补肾健脾方具有提高自然衰老雌性小鼠卵巢功能，提高其在IVF中的卵巢反应性。 2齐氏补肾健脾方可提高自然衰老小鼠的生殖表现。 3齐氏补肾健脾方可提高自然衰老小鼠的卵泡发育效率，提高各级卵泡数量。 4齐氏补肾健脾方可上调卵源性转录因子NOBOX的表达，对卵源性生长因子GDF-9的表达可能有一定作用。 5齐氏补肾健脾方调控卵泡发育，改善自然衰老小鼠的卵巢反应性的作用机制可能与其对NOBOX及其对下游生长因子GDF-9的调控有关。