十字花科植物防御素基因克隆和原核表达及转拟南芥研究

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植物防御素(Plant defensins)是一类碱性短肽,具有广谱抗微生物活性,是天然免疫体系中的重要效应分子。目前已经在拟南芥、萝卜等植物中,分离到了80多种的植物防御素。由于植物防御素特殊的三级结构,它可以抑制多种真菌的生长而对植物细胞没有伤害。植物防御素能保护种子的正常萌发,并且保护植物组织免受病原菌的危害。 根据Genebank上十字花科已登陆的植物防御素基因序列,设计以下一对PCR扩增引物:5′-ATGGCTAAGTTTGCTTCC-3′和5′-TTAACA TGGGAAATAACAGATAC-3′,分别从十字花科白芥和兰花子种子中克隆出了243 bp的植物防御素基因Sad和Rsvd。将克隆的基因全长cDNA在NCBI上进行比对,白芥防御素基因与甘蓝型油菜防御素和萝卜防御素Rs-AFP1具有90%的同源性。兰花子是萝卜变种,它与萝卜防御素Rs-AFP2和萝卜防御素Rs-AFP1分别具有98%和92%的同源性;与拟南芥防御素PDF1.1有87%的同源性。 利用网站和多种生物学软件对Sad和Rsvd基因cDNA序列推导除的氨基酸序列进行了分析。分析结果表明Sad和Rsvd氨基酸序列有以下特征:(1)包含8个保守的半胱氨酸位点;(2)含有4个由半胱氨酸形成的二硫
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