染色体原位杂交在多星韭(Allium wallichii Kunth)和滇韭(Allium mairei Lévl)的应用

来源 :云南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ppasu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
原位杂交技术是分子生物学、组织化学和细胞生物学相结合的产物。该技术是根据核酸分子碱基互补原则,将标记的DNA或RNA探针与染色体上经过变性后的单链DNA片段或组织、细胞上特定的核苷酸序列,在适宜条件下结合形成专一的核酸杂交分子,再经过相应的检测手段,将待测核酸在染色体、组织或细胞上的位置显示出来。原位杂交技术是由Gall和Parue(1969)利用标记的rDNA探针与非洲爪蟾细胞核杂交首次获得成功。随着植物染色体制备技术的改进,Rayburn(1985)最早将非放射性检测系统应用到植物染色体原位杂交。目前,该技术在基因定位、多倍体起源、非整倍体鉴定以及系统进化和亲缘关系等方面均得到广泛应用。   B染色体(Bs)是不与常染色体组中任意染色体发生重组,不遵循孟德尔遗传模式的一类非必需的染色体。Bs可能在物种进化、遗传育种和染色体行为机制等方面具有重要意义。关于Bs的起源,目前仍无定论,但要研究Bs就必然涉及起源问题。多星韭和滇韭居群中含Bs植株比例相对较高,且染色体大而少是研究Bs的一个好材料。   本实验以多星韭和滇非为材料,制备多星韭Bs DNA和基因组DNA探针后,与多星韭二倍体、四倍体以及滇韭进行原位杂交,摸索原位杂交流程。通过实验得知,用多星韭二倍体和滇韭制片,进行原位杂交的关键步骤为探针标记、制片、预变性、共变性。首先要确保探针标记成功,这是实验进行的前提;制片时用0.25MHCl常温解离3min后洗净,蒸馏水浸泡10min,酶解30min后涂片并于60℃烘烤2h,好的分裂相也是必不可少的条件;用70%甲酰胺70℃预变性2min;73℃共变性5min。适合多星韭四倍体的条件大多数相同,但预变性温度为71℃。   原位杂交结果表明,多星韭二倍体基因组作探针与本种染色体杂交信号强烈,与滇韭染色体杂交仅在部分染色体端部出现信号;多星韭Bs DNA做探针与多星韭二倍体杂交信号仅仅出现在Bs上,常染色体上未见信号,但在细胞核中出现信号;多星韭Bs DNA作探针与四倍体杂交,在染色体和细胞核中均出现Bs的杂交信号。由此认为原位杂交可以应用于多星韭滇韭常染色体基因组和B染色体的研究,但要作适当修改;滇韭与多星韭可能亲缘关系较远:.由LA-PCR扩增所得到的Bs片段可能为特异片段,其来源仍有待于研究;Bs可能整合到多星韭四倍体常染色体基因组中。
其他文献
萜类是一类重要的天然有机化合物,在植物的各种生理活动中起着重要的作用。虽然自然界萜类化合物种类数量巨大,但是其都是由基本结构单元异戊二烯(C5)组成。根据萜类含有的异戊
在环境监测、军事侦察和天基空间目标监测等领域,获取目标的长波红外辐射数据对研究有着重要意义。本课题对截止波长大于12.5μm的星载长波红外焦平面成像系统展开了探索研究,
在生物物理和生物化学等实验研究中,实验样品需要在指定的温度下才能获得可靠的科研数据,因此温度测控系统就成为实验分析仪的重要组成部分。各类含温度测控的实验仪器,其加热平
约瑟夫森效应具有十分广泛的应用,直流约瑟夫森效应可用于测磁场,交流约瑟夫森效应可用于测电压、作辐射源。它在高频方面也有重要的应用,近年来,以约瑟夫逊结为基本元件,已研制出
随着科技的进步和人民生活水平的不断提高,视频监控系统在工业生活、国家安防、日常生活中得到了广泛的应用。视频监控技术融合了计算机、多媒体、通信及网络等多项技术,成为人
嵌入式视频传输系统就是一种以嵌入式技术、图像压缩编码技术、网络传输控制技术于一体的综合系统。它是视频监控中重要的部分,并以其直观、方便、信息内容丰富等特性而被广泛
中医舌诊是中医四诊(望、闻、问、切)中望诊的重要内容,是中医临床上不可缺少的常规检查,在中医诊断中占有重要地位。近年来,随着信息技术的发展,中医舌诊的客观化研究取得了突破性
学位
光学陀螺是一种基于Sagnac效应的角速度传感器,其中激光陀螺与光纤陀螺已经完全成熟并广泛应用于高精度的惯性导航领域。对于某些中等精度(1~10°/h)的应用,需要小型化、集成化
全球定位系统(GPS)是全球导航卫星系统(GNSS)中应用最广的一种系统。目前,GPS市场已经进入了广泛型发展阶段,各种类型的应用在方便用户的同时,也对GPS接收机的性能提出了更高的