若干生物活性分子对蛋白质(酶)电催化活性影响的研究

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本文主要从以下几个方面展开: 1、红景天苷对血红蛋白携氧能力增强效应的研究 采用聚乙烯基亚胺(PEI)修饰的热解石墨电极,研究了中草药红景天苷在体外对血红蛋白携氧能力的增强效应。在氧气存在的条件下,血红蛋白溶液中加入红景天苷后,氧气的还原峰电流随着加入的红景天苷的量而随之相应地增大,而无氧条件下则不存在这样的情况。此外,红景天苷对血红蛋白携氧能力的增强效应在较低的氧浓度下更为显著。紫外—可见光谱分析显示了红景天苷并没有明显改变血红蛋白的构象。 2、β-环糊精对氰钴胺素电子转移和催化活性的影响 对氰钴胺素的电化学性质和电催化活性进行了研究。结果表明β-环糊精可以增强氰钴胺素在热解石墨电极表面的吸附能力。此外,它还能促进电子在氰钴胺素和电极之间传递的速率。在循环伏安图中,可观测到氰钻胺素一对在[Co(Ⅲ)]/[Co(Ⅱ)]之间准可逆的氧化还原峰。相对甘汞电极的标准电位约为—790 mV,远低于以前的报道。进一步研究表明,在β-环糊精的帮助下,氰钴胺素对一氧化氮、亚硝酸根离子和三氯乙酸的还原具有显著的电催化活性,为发展非酶传感器以及研究酶催化活性的本质问题提供了许多有用的信息。 3、溴代双十二烷二甲胺对胆碱氧化酶直接电化学以及电催化活性影响的研究 利用阳离子界面活性剂溴代双十二烷二甲胺(DDAB)得到了胆碱氧化酶的直接电化学。在0.1M pH 7.0的磷酸缓冲液中,其氧化峰电位和还原峰电位分别为—0.358 V和—0.386 V。胆碱氧化酶依然保持了它的生物活性和对其底物胆碱的电催化活性。基于此,我们可以构建第三代胆碱生物传感器。 4、1,12-二胺基十二烷对血红蛋白直接电化学和催化作用的研究 使用1,12-二胺基十二烷(DAD)在热解石墨电极表面构建了仿生物膜。实验表明,DAD膜能有效地把血红蛋白固定在电极表面并促进其与电极表面的电子传递,因而可以作为一种很好的仿生界面,用来研究血红素类蛋白质电化学性质和功能。研究同时发现,由血红蛋白和DAD共修饰的电极,对过氧化氢具有良好的催化作用。作为仿生膜界面的初步应用,我们构建了第三代过氧化氢生物传感器。这种传感器具有良好的灵敏度、较好的选择性、以及很高的稳定性,并可应用于在生理pH条件下过氧化氢的检测。 5、聚乙二醇与两种血红素蛋白质相互作用的研究 将血红蛋白或肌红蛋白与聚乙二醇(PEG)膜共修饰在热解石墨电极表面,通过循环伏安法研究了这两种蛋白质的直接电化学行为及其催化活性。在pH5.0的缓冲溶液中,两种蛋白质在—0.21V附近都表现出了一对很好的、准可逆的氧化还原峰。这表明在PEG膜内,蛋白和电极之间的直接电子传递得到了很大的提高。另外,这种蛋白—PEG修饰电极表现了很好的稳定性。蛋白—PEG的紫外吸收光谱表明在中性pH条件下,在PEG膜内的蛋白可以很好地保持三维结构。进一步研究表明,在PEG膜内的两种蛋白质都可对氧气、三氯乙酸、一氧化氮和过氧化氢表现出良好的电催化活性。 6、甲基丙烯酸二甲氨乙酯对血红蛋白电催化活性作用的研究 成功地将血红蛋白包埋于甲基丙烯酸二甲氨乙酯(DMAEMA)膜内并修饰在热解石墨电极表面。紫外—可见光谱表明血红蛋白的三维结构在膜内得到了很好的保持,与自然状态相似。循环伏安图显示血红蛋白在-206 mV附近有一对准可逆的氧化还原峰。本研究还通过层层吸附的方法构建了6层Hb—DMAEMA 膜,并运用循环伏安法和方波伏安法对其进行了深入的研究。 另外,我们还探讨了包埋于该膜内的血红蛋白对于过氧化氢的催化能力。
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