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马绒毛膜促性腺激素(Equine chorionic gonadotropin,eCG),又名孕马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotropin,PMSG),是一种糖蛋白激素,主要用于促进卵泡发育成熟、黄体生成及精子形成,可用于治疗牲畜死精、性欲不强、不孕等病症。市售eCG均自孕马血清中分离纯化得到,但由于它在孕马血清中的浓度较低(约为60IU/mL),且具有不均一性及易失活的特点,eCG分离纯化难度较大、生产成本较高。本文对孕马血清中eCG的分离方法进行研究,探索了适宜的分离、纯化方法,考察了离子交换层析在eCG分离纯化中的作用;并创造性地利用疏水作用层析进行了 eCG的纯化和精制研究,取得较为理想的分离效果;最后考察了由卵巢增重法测定得到的eCG活性,eCG免疫活性与N-乙酰神经氨酸(N-acetyl neuraminic acid,Neu5Ac)的关系。1)对粗分离的方法进行筛选,通过条件优化,确定了最佳沉淀条件,探索了从孕马血清中粗分离得到eCG的适宜方法,所得eCG的比活为80-150IU/mg,活性回收率达到90%以上。2)利用离子交换层析,对eCG粗分离产物的进一步纯化进行了研究,筛选并确定适宜的介质,优选了上洗脱缓冲溶液条件。经一步离子交换层析,纯化产物比活达到1124.41 IU/mg,活性回收率为53.68%。3)探索了利用疏水作用层析进行eCG粗品纯化和精制的可行性,筛选比较了不同疏水作用层析介质的性能;考察了上样缓冲溶液组成及离子强度对eCG吸附性能的影响,确定最佳的上样缓冲溶液组成;优选适宜的分离条件。经一步疏水作用层析,纯化产物比活达到1429.86 IU/mg,活性回收率达到88.66%。相对于离子交换层析,纯化效果得到显著提高。4)探索了通过测定唾液酸(Neu5Ac)含量表征eCG活性的可行性。采用柱前衍生化方法,利用高效液相测定Neu5Ac的含量,优选最佳的衍生化温度、衍生化时间、衍生化反应物(O-phenylenediaminedihydrochloride,OPD)的浓度。通过考察优化了从eCG中水解释放Neu5Ac的水解反应方法和条件,并确定最佳水解时间、水解温度、水解反应物三氟乙酸(Trifluoroaceticacid,TFA)浓度;进行了水解液中Neu5Ac含量的HPLC测定,建立了孕马血清中Neu5Ac含量的测定方法;探讨了孕马血清中Neu5Ac含量与eCG活性的关系,研究表明由卵巢增重法测定得到eCG的活性,eCG免疫活性均与Neu5Ac含量呈正相关关系。