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梨树腐烂病菌(Valsa pyri)为子囊菌亚门真菌,它侵染梨树引起枝干的枝枯、溃疡,甚至死亡,造成梨树腐烂病,该病害每年在全世界对梨产量与品质均造成巨大危害,尤其在东亚地区损失严重。梨树腐烂病菌主要在韧皮部以下侵染和定殖,生产上主要是通过刮除患病组织再涂抹化学药剂来控制病害,该技术费工费时并且杀菌剂很难发挥效用,而刮涂又会使树势减弱抗性降低,造成病害越控越重的“恶性循环”。因此从分子水平上研究该病原菌的致病成灾规律和机理能为病害防控水平的提高奠定基础。在大规模梨树腐烂病菌分离纯化的基础上,本研究选择了两个代表性菌株(Vp297与Vp14),其中Vp297表现为子实体正常形成,而Vp14不能形成子实体,同时Vp14的生长速度更快,致病能力更强。通过对这两个菌株在侵染、生长与发育不同阶段的转录组测序、序列拼接、功能注释与差异表达分析,我们发现梨树腐烂病菌与其它死体营养型病原菌一样,细胞壁降解酶、转运子、蛋白激酶、转录因子、尤其是热休克蛋白(HSPs)等表达丰度高。Vp14分泌的果胶酶、细胞壁降解酶与糖转运蛋白在数量上及表达量上均多于Vp297,且它的细胞壁降解酶、金属蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶等也明显多于Vp297,说明Vp14能更有效地侵染寄主并利用寄主植物的营养物质,从理论上解释了该病原菌致病能力强的机制;而Vp297中信号传导途径相关基因表达数比Vp14更多,可能与其子实体形成有关。转录因子在真菌生活史的各个方面都起着重要的调节作用,但在梨树腐烂病菌尚无研究报道。为了研究转录因子的功能与机制,我们首先建立并优化了梨树腐烂病菌的遗传转化体系;鉴定了一个在梨树腐烂病菌侵染过程中上调表达的Zn2Cys6类转录因子VpPf2,该转录因子包含两个Zn2Cys6结构域与一个真菌特异结构域。利用建立的遗传转化体系,获得了该基因敲除和互补的转化子,分析发现该基因敲除后不影响梨树腐烂病菌生长、菌丝形态与分生孢子器的形成,但对细胞壁的完整性与致病性至关重要。因此本文明确了真菌特异转录因子VpPf2在梨树腐烂病菌中的功能。我们从Valsa pyri中鉴定了 一个钙离子或钙调素依赖的转录因子VpCRZ1,并分析了其功能。结果表明,敲除突变体△VpCRZ1与相比野生型相比,致病力降低,同时发现该突变体不能产生分生孢子器;同时该转录因子能负调控色素的沉积和细胞壁完整性。进一步的研究发现,VpCRZ1负调控细胞壁的完整性是通过负调控刚果红抗性基因RCR1与RCR2及细胞壁合成酶基因CHS2与CHS2的表达。与其它真菌CRZ1类似,VpCRZ1在钙离子的诱导下,能大量的从细胞质聚集到细胞核中,与之相对应的是,应答钙调素的基因FKS1、PMC1、PMC2、PMR1和PMA1的表达受VpCRZ1调控。这些结果说明VpCRZ1是一个钙调素依赖的转录因子,是梨树腐烂病菌中调节菌丝形态、分生孢子器形成以及致病力所必不可缺少的一类调控因子。