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目的:巨噬细胞浸润是包括糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)在内的多种慢性肾脏疾病的重要病理特征,这一过程与肾组织中巨噬细胞的黏附迁移,巨噬细胞表型改变有着密切关系。自噬通过降解错误折叠蛋白和功能失调的细胞器,维持细胞正常的生理功能,是一个高度动态的、多阶段的过程,也称为自噬流,主要包括自噬体和自噬溶酶体两个阶段。但是,自噬与巨噬细胞功能和表型之间的关系尚不十分清楚。本研究通过调控巨噬细胞自噬体生成与自噬溶酶体融合降解过程,探索自噬流各阶对巨噬细胞自噬水平及其黏附迁移功能的影响。方法:(1)体内实验,12w末处死正常大鼠、DN组大鼠,观察肾脏病理改变,检测肾组织巨噬细胞标志物CD68及自噬相关标志物LC3(自噬体标志物)、P62(自噬体清除指标)的表达。(2)体外实验,Western blot、免疫荧光检测正常与高糖(30mM)条件下,自噬体生成激活剂(RAPA)、自噬体生成抑制剂(3-MA)、自噬溶酶体融合抑制剂巴弗洛霉素A1(BAFA)、自噬溶酶体降解抑制剂氯喹(CQ)对巨噬细胞自噬标记物表达及其粘附迁移功能的影响。电镜观察巨噬细胞自噬体数量及自噬溶酶体形态的变化。结果:(1)体内实验(1)构建DN大鼠模型,与NC组比较,12周末DN组大鼠血糖、肾重体重比(KW/BW)、Scr、BUN、24h尿蛋白量升高(P<0.05),DN组大鼠体重下降(P<0.05),提示DN模型建立成功;(2)DN组大鼠肾损伤加重,表现为肾小球体积增大,基底膜增厚,系膜基质增多;(3)12周DN组大鼠肾组织巨噬细胞浸润增多,巨噬细胞标志物CD68表达增加(P<0.05);(4)12周DN组大鼠肾组织巨噬细胞P62(自噬体清除指标)表达增加,LC3(自噬体标志物)表达减少(P<0.05);(2)体外实验(1)电镜观察发现高糖(HG)和3-MA组巨噬细胞自噬体数量减少,Western与免疫荧光显示自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达降低,P62表达升高(P<0.05),巨噬细胞粘附和迁移数量增多(P<0.05);(2)电镜发现BAFA与CQ分别抑制巨噬细胞自噬体溶酶体融合与降解过程,巨噬细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达降低,P62表达升高(P<0.05),巨噬细胞黏附迁移数量进一步增多(P<0.05);(3)电镜观察RAPA增加巨噬细胞自噬体数量,Western与免疫荧光显示RAPA提高了被高糖抑制的巨噬细胞自噬水平(P<0.05),抑制被高糖诱导的巨噬细胞黏附迁移数量(P<0.05)。结论:调控自噬流各阶段(自噬体生成与自噬溶酶体融合降解)可以改变巨噬细胞自噬水平,并对巨噬细胞粘附迁移功能进行可塑性调控:1、HG、3-MA抑制巨噬细胞自噬体生成,降低自噬水平,促进巨噬细胞粘附和迁移;2、高糖状态下,RAPA可激活巨噬细胞自噬体生成,恢复被HG抑制的自噬水平,抑制巨噬细胞粘附和迁移;3、BAFA、CQ抑制巨噬细胞自噬溶酶体融合和降解过程,降低自噬水平,促进巨噬细胞粘附迁移。