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血栓调节蛋白的表达与子宫动脉阻断治疗子宫肌瘤机制的相关性研究
背景:
子宫肌瘤是育龄妇女常见的良性肿瘤。目前手术仍为治疗子宫肌瘤的主要方式。随着人们生活水平的提高和医学知识普及,越来越多患者选择保留子宫手术。1995年法国医师Ravina首次报道采用介入子宫动脉栓塞术(uterine arteryembolization,UAE)治疗子宫肌瘤并获得成功,随后一些学者通过腹腔镜技术阻断子宫动脉(uterine artery occlusion,UAO)也获得同样的临床效果。虽然这两种方法临床应用广泛,疗效确切,但其治疗机制尚不清楚。Burbank等提出:UAE使子宫处于短暂休克状态(uterine ischimia),导致子宫缺血缺氧。大约在术后6小时,子宫血供开始恢复循环再灌注。经过短暂的休克期,肌瘤发生变性、坏死,而正常子宫平滑肌依然存活并恢复生理活性。
我们自2000年也开展了腹腔镜下子宫动脉阻断术治疗子宫肌瘤。临床实践中,我们并未发现患者出现类似UAE术后持续低热、下腹痛等栓塞综合征症状,且无患者因子宫缺血坏死行子宫切除。我们推测,UAO与UAE在治疗机理上存在根本不同:UAE将不可吸收的PVA等微颗粒注入子宫动脉,使子宫血管网永久性栓塞;而UAO仅对子宫动脉作阻断,下游微循环血管网结构并无破坏,经历短暂缺血后,子宫通过侧枝循环重新恢复血供;在子宫动脉阻断后,子宫平滑肌和子宫肌瘤的血管内血流停滞,血液凝血系统激活,凝血过程启动,血栓形成,与此同时,血液纤溶系统也激活,溶栓过程启动,溶解血栓;而凝血/纤溶系统在子宫平滑肌和子宫肌瘤局部可能存在差异,进而微血栓造成的微循环障碍也有所不同,最终形成子宫肌瘤缺血缺氧凋亡萎缩而子宫平滑肌迅速恢复正常生理机能的结局。这同时也可能是UAO术后患者很少出现持续下腹痛、持续低热、甚至子宫缺血坏死等并发症的原因。
在众多凝血调节因子中,血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)由血管内皮细胞特异表达,是重要的调节抗凝血、纤溶因子之一。在调节血栓形成过程中,TM主要通过对蛋白C信号通路的调节发挥抗凝和促纤溶作用[7]。生理状况下蛋白C(Protein C,PC)以无活性的酶原形式存在,在凝血酶(thrombin)激活下变成活性蛋白C(Activated Protein C,APC)而发挥生物效应。凝血酶与其受体TM结合后可以显著放大其生物作用,结合了TM的凝血酶激活PC的速率大约是未结合TM的20000倍以上[8]。为此本研究选择血栓调节蛋白这一重要抗凝/纤溶调节因子,通过免疫组化(IHC)、免疫印迹(Western Blot)、实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测子宫平滑肌及子宫肌瘤中TM的分布与表达情况,以期为子宫动脉阻断术治疗子宫肌瘤寻求理论依据。
材料与方法:
1)选择因子宫肌瘤行子宫切除术患者15例,取子宫肌瘤及子宫平滑肌1g,进行ABC免疫酶标染色,检测TM的分布。
2)选择因子宫肌瘤行子宫切除术患者15例,取子宫肌瘤及子宫平滑肌1g,进行ECL化学发光免疫印迹,检测TM在两种组织中的含量。
3)选择因子宫肌瘤行子宫切除术患者19例,取子宫肌瘤及子宫平滑肌1g,进行Taqman实时荧光定量PCR,检测TM基因mRNA转录。
结果：:1)ABC免疫酶标染色:TM表达主要表达于血管内皮细胞,平滑肌细胞和肌瘤细胞仅少量表达。
2)ECL化学发光免疫印迹:TM分子量105KD;子宫平滑肌的TM表达量约为子宫肌瘤的1.49倍,两者比较有显著性差异(P＜0.01)
3)Taqman实时荧光定量PCR:子宫平滑肌TM的mRNA转录相对量约为子宫肌瘤的1.28倍,统计学检验有显著性差异(P＜0.05)。与免疫印迹检测结果一致。
结论：:
血栓调节蛋白在子宫平滑肌与子宫肌瘤间存在差异,子宫平滑肌TM mRNA转录与蛋白表达显著高于子宫肌瘤,提示子宫平滑肌抗凝/纤溶能力可能强于子宫肌瘤。这可能是子宫动脉阻断术治疗机理中的重要因素。