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研究背景聚焦超声作为现代兴起的一种无创治疗技术正广泛应用于临床治疗,尤其在治疗难治性高复发率的疾病中,其优势更为凸显,如外阴白色病变治疗有效率高达94.7%,远高于传统的治疗。一般而言,超声引起的生物效应可以大致分为热效应和非热效应,其效应取决于超声能量的大小与生物材料之间的相互作用程度。外阴白色病变治疗所用的聚焦超声近场复杂、远场简单,而且近场声强起伏不均,这也提示聚焦超声对组织所产生的生物学效应相对比较复杂。临床研究发现,经聚焦超声治疗后,病变部位活检组织中内皮细胞增多,微血管密度增加,组织微血管重构。对此,从另一角度也提示组织内的大部分内皮细胞在聚焦超声治疗过程中只经聚焦超声声通道复杂的近场刺激,未被凝固性致死,而且还在后续组织重建恢复中发生增殖和血管重构,就其原因,尚不清楚。故本研究拟采用外阴白色病变常用临床治疗参数条件下的聚焦超声近场作用于体外内皮细胞,了解对内皮细胞相对成活比的影响,并借鉴蛋白质组学方法就其参与该效应的蛋白质进行初步鉴定阐释这一生物学效应。目的1.聚焦超声近场对体外内皮细胞ECV304增殖的影响。2.聚焦超声近场对体外内皮细胞ECV304蛋白质的影响。方法1.聚焦超声近场对内皮细胞ECV304增殖的影响:实验分组:辐照功率:4.3、5 W;辐照频率:10.1、11.2 MHz;辐照时间:5、10、15、20、25、30 s。实验方法:MTT法检测不同参数条件下的聚焦超声近场对体外培养ECV304增殖的影响。2.最佳聚焦聚焦超声近场辐照参数的筛选:用SAS统计软件分析内皮细胞相对成活比(OD处理组/OD正常组),筛选出细胞最大成活比时的聚焦超声近场辐照参数。3.聚焦超声近场对内皮细胞内蛋白质的影响:实验分组:正常对照组、聚焦超声近场辐照组(辐照参数设置11.2 MHz、4.3 W、10 s)。实验方法:采用一维SDS-PAGE电泳(色谱)-电喷雾离子阱质谱技术检测聚焦超声近场辐照内皮细胞前后的差异蛋白质;免疫印迹验证差异蛋白Actin的表达。结果1.聚焦超声近场辐照后ECV304的增殖依赖于辐照的功率、频率、时间;与其他对照组相比,在辐照功率4.3 W、频率11.2 MHz、辐照时间10 s的条件下,最有利于细胞增殖。同时,经聚焦超声近场辐照后的ECV304生长形态改变,近圆形。2.结合相关文献和实验中细胞增殖具体情况,我们将采用辐照功率4.3 W、频率11.2 MHz、时间10 s的聚焦超声近场进行后续实验。3.聚焦超声近场处理前后ECV304的总蛋白通过一维SDS-PAGE电泳后,在相对分子量为95～130 kD区域出现较为明显的差异条带(实验重复三次)。4.电喷雾离子阱质谱检测差异蛋白质条带,初步鉴定出7个差异蛋白质。其中,比例最大的一部分蛋白质参与细胞信号转导,29%为细胞骨架蛋白,28%参与细胞运动。5.免疫印迹验证Actin(差异蛋白质之一)在聚焦超声近场辐照前后ECV304中的表达水平,同质谱鉴定结果一致。结论1.聚焦超声近场辐照ECV304后能影响其增殖和细胞生长形态;辐照功率4.3 W、频率11.2 MHz、时间10 s为促进ECV增殖的最佳辐照参数。2.聚焦超声近场作用于ECV304后引起细胞内蛋白质组分的变化,可能为内皮细胞生物学形态、功能改变提供了基础条件。