人巨细胞病毒感染小鼠大脑皮质细胞的体内外实验研究

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目的:研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在体外可以增殖性感染新生小鼠大脑皮质细胞;在体内可以先天性潜伏感染小鼠大脑皮质细胞,并且可以被再激活。 方法:体外试验:选用HCMV AD169株和3株HCMV临床分离株作为本次实验的毒种,并设立经高温灭活后HCMV AD169株对照组。对所有毒株进行50%组织细胞感染量(TCID50)测定,然后在长成单层的Balb/c新生小鼠的大脑皮质细胞和HF细胞6孔板上分别接种相同滴度的病毒悬液0.1ml/孔。逐日镜下观察HCMV特征性细胞致病变效应(CPE),同时采用PCR、RT-PCR、间接免疫荧光检测HCMV特异性基因IE和UL83的复制和蛋白表达,确定HCMV感染状态。分别在感染后第1、2、3、4、5天收集细胞及其培养上清液,采用TCID50法检测被感染的新生小鼠大脑皮质细胞培养物上清的病毒滴度,每种病毒标本分两组,每组重复三次;并且在不同的时间点固定细胞片进行HCMV特异性早期蛋白和pp65蛋白免疫荧光检测;透射电镜观察大脑皮质细胞内HCMV病毒颗粒。体内试验:利用已建立的HCMV先天性潜伏感染的小鼠模型。试验分为三组:HCMV先天潜伏感染组、HCMV先天性潜伏感染再激活组(小鼠腹腔注射环磷酰胺150mg/kg,每6天1次,共3次)、HF细胞对照组小鼠。在各组小鼠达18~20月龄时,分别在各组随机选取小鼠5只。取HCMV先天性潜伏感染组、HCMV先天性潜伏感染再激活组小鼠和HF细胞对照组小鼠大脑皮质细胞与HF细胞建立共培养体系。利用PCR、RT-PCR、间接免疫荧光检测HCMV特异性基因IE和UL83的复制和蛋白表达。 结果:体外试验研究:将TCID50为1.7×103/ml HCMV AD169株病毒悬液接种在新生小鼠大脑皮质细胞培养物上,在感染后第2天可见神经细胞形态明显改变:镜下
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