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我国地大物博,各种资源极其丰富,植物类资源就是其中的一种。桃树属于植物类资源,在我国被广泛种植。桃叶,作为这种植物资源中数量较大的一部分,却没有得到很好的开发和利用。桃叶具有很多的药效作用,例如它具有抗过敏、抗菌、消炎、止痛、通便的作用,另外,它还有杀虫的功效。但是,目前对桃叶的综合开发利用研究还很少。桃叶的药用价值与桃叶中含有的有效成分是密不可分的。所以,本文以得到品质优良的有效成分产品为主要目标,针对其提取、纯化及检测方法进行了深入的研究和探索,以便得到提取纯化这些有效成分的最先进、最经济实用的工艺。本研究得出的结论为桃叶合理有效的利用提供了参考依据,具有一定的理论意义和应用价值。
本文以桃叶为原料,用超临界CO2萃取法提取桃叶中的柚皮素和叶绿素,研究萃取温度、萃取压力、萃取时间和夹带剂添加量对产品得率的影响。通过试验,确定最佳工艺为:萃取温度60℃,萃取压力30MPa,萃取时间6h,料液比1∶2.0(桃叶与95%乙醇的质量比)。检测结果显示,超临界CO2萃取法是提取桃叶中柚皮素和叶绿素最有效的方法。将粗提物用高速逆流色谱技术进行纯化,得出最佳的纯化条件为:选用氯仿∶甲醇∶水(4∶3∶2)这个容剂体系进行分离,上相为固定相(水相),下相为流动相(氯仿相),转速为800r/min,流速为1.5mL/min。最后,经计算,从100g原料可以得到6.25g粗提物浸膏,经过HSCCC纯化后可以得到0.38g叶绿素和2.00g柚皮素产品,二者纯度分别为90%和95%以上。
本文采用有机溶剂法和超声波辅助萃取法对桃叶中的总黄酮进行了提取。通过试验,确定有机溶剂提取法(乙醇)的最佳工艺为:乙醇浓度70%、时间4h、温度60℃、料液比1∶25(g∶mL);采用超声波辅助萃取法的最佳工艺为:溶剂为70%乙醇、萃取温度60℃、料液比1∶20(g∶mL)、超声波功率225w、萃取时间40min。有机溶剂法可以使总黄酮得率达到7.48%;超声波辅助萃取法可以达到7.51%。二者提取结果虽然相近,但是后者所用时间明显短于前者,溶剂用量也小于前者。所以,采用超声波辅助萃取法提取桃叶中的总黄酮不仅可以大大缩短生产周期,还可以减少溶剂用量降低成本。将总黄酮粗提物用大孔吸附树脂法进行纯化,其最佳纯化工艺为:将超声波辅助萃取法得到的粗提液用石油醚法除去叶绿素后,采用AB-8大孔吸附树脂,将浓度为0.112mg/mL的上柱液上柱4BV,以1.0mL/min吸附流速进行吸附,吸附完毕后,用浓度为80%的乙醇溶液进行洗脱,洗脱流速为0.6mL/min,收集洗脱液即得到总黄酮纯化液。经测定,收集液干燥后得到的纯化物中,总黄酮的含量为46.1%。
本文确立了薄层层析法定性分析桃叶中柚皮素的方法,分析条件为:吸附剂,薄层层析硅胶;展开剂,氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(15∶40∶22∶10),10℃以分层的下层溶液为展开剂;检出,2%的三氯化铝乙醇试液,置紫外灯(365nm)下观察。柚皮素经络合后在紫外灯的照射下显黄绿色荧光。
本文确立了紫外分光光度法分析桃叶中柚皮素的方法。对柚皮素标准品和超临界提取物进行光谱扫描,结果显示二者在325nm处有吸收峰,因此确定325nm为紫外分光光度法分析柚皮素的检测波长。紫外分光光度法简便,对样品处理要求不高,可以作为常规的分析方法。
本文确立了高效液相色谱法(HPLC)分析桃叶中的柚皮素和奎宁酸的方法。分析桃叶中柚皮素的HPLC条件为:流动相,甲醇-水-乙酸(46∶53∶1);柱温,40℃;色谱柱,ODS反相柱,250×4.6mm,孔径5μm;流速,1mL/min;检测波长,290nm。分析桃叶中奎宁酸的HPLC条件为:流动相,3%甲醇-0.01mol/L磷酸氢二钠(pH2.53,用浓度≥85.0%的磷酸调节,酸碱滴定仪调节控制);柱温,30℃;色谱柱,ODS反相柱,250×4.6mm,孔径5μm;流速,0.7mL/min;检测波长,210nm。HPLC法具有灵敏、准确等特点。本文所确定的HPLC方法可以为生产过程中更为准确地进行柚皮素和奎宁酸的检测提供依据。
另外,本文还初步研究了柚皮素纯化物的抑菌活性。试验结果表明,柚皮素对大肠杆菌的抑菌能力要高于对金黄色葡萄球菌的抑菌能力,在柚皮素浓度为15mg/mL时二者对柚皮素均表现为中度敏感。