【摘 要】
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目的:研究BMP9是否可以通过激活ERK5信号通路调控iSCAP细胞成骨/成牙本质分化。方法:首先,实验分为四组,空白组,GFP控制组,BMP9阳性对照组和BMP+BIX02189实验组。然后采用Wes
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目的:研究BMP9是否可以通过激活ERK5信号通路调控iSCAP细胞成骨/成牙本质分化。方法:首先,实验分为四组,空白组,GFP控制组,BMP9阳性对照组和BMP+BIX02189实验组。然后采用Western Blot实验检测Ad-BMP9转染iSCAP后ERK5蛋白的磷酸化水平变化及其加入ERK5抑制剂BIX02189后的变化;采用碱性磷酸酶(ALP)染色方法检验早期成骨/成牙本质标志物的变化;RT-PCR分析成骨/成牙本质相关基因Runx2、骨钙蛋白、骨桥蛋白和牙本质基质蛋白1的m RNA表达水平的变化。最后茜素红染色观察钙盐沉积程度来检测晚期成骨/成牙本质标志物的变化。结果:(1)BMP9可以上调iSCAP中P-ERK5的表达水平,证实BMP9-ERK5通路存在于iSCAP细胞成骨/成牙本质分化过程中;(2)在ERK5抑制剂BIX02189作用下,iSCAP细胞中ERK5的磷酸化表达下降显著,但ERK5总蛋白表达量变化不明显;(3)ALP染色实验发现加入抑制剂的实验组iSCAP细胞中的ALP阳性染色比BMP9组明显降低;(4)RT-PCR检测的成骨/成牙本质相关基因Runx2、骨钙蛋白、骨桥蛋白和牙本质基质蛋白1的转录水平显示加入抑制剂的实验组其表达也受到了抑制;(5)茜素红染色同样发现抑制剂组钙盐沉积颗粒比BMP9组显著减少;(6)通过一系列体外细胞实验从早/中/晚期成骨/成牙本质标志物的变化都揭示了随着ERK5通路的抑制,BMP9诱导的根尖牙乳头干细胞成骨/成牙本质分化也会被抑制。结论:证实ERK5信号通路参与了BMP9促进根尖牙乳头干细胞成骨/成牙本质分化过程,而加入ERK5抑制剂后其根尖牙乳头干细胞成骨/成牙本质的分化受到抑制,具体作用机制还需要其他体外实验及相关体内动物实验进一步研究探索。
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