【摘 要】
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池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)原产自于日本,是一种新型优质的淡水育珠蚌类,具有重大的经济价值,其性别决定及分化机制的研究可为池蝶蚌的种质资源保护、种群结构和个体发育
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池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)原产自于日本,是一种新型优质的淡水育珠蚌类,具有重大的经济价值,其性别决定及分化机制的研究可为池蝶蚌的种质资源保护、种群结构和个体发育、繁殖等研究提供理论上的依据和参考。有关性别决定相关基因的研究在脊椎动物中已有了相当多的报道,然而,在无脊椎动物特别是淡水贝类中的相关研究却很少见。本研究从池蝶蚌转录组数据中得到的致雄化基因feminization-1a(以下简称Hsfem-1a)的部分片段,借助于RACE PCR反应和Real-time PCR技术克隆出该基因全长并对其表达谱进行了分析,为池蝶蚌性别决定及分化机制的进一步研究提供了基础。池蝶蚌fem-1a基因的c DNA序列全长为1356 bp,5’端非编码区(UTR)长122 bp,3’端非编码区(UTR)长355 bp,开放阅读框(ORF)长879 bp,编码292个氨基酸,预测分子量约为32.13 KDa,理论等电点为7.62;氨基酸组成成分中亮氨酸(Leu)含量最高,约为15.1%;蛋白的不稳定系数是34.71,为稳定蛋白;无信号肽结构;亲疏水性分析显示该蛋白为疏水性蛋白。二级结构预测发现该蛋白中含有大量的α-螺旋和无规则卷曲,分别占39.73%和34.25%,形成4个锚蛋白重复序列(ANK);三级结构预测中同样发现了4个ANK模体,并且SMART结构位点的预测结果相同。同源性比对和进化树分析显示,池蝶蚌fem-1a基因编码的氨基酸与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)的同源性最高。池蝶蚌fem-1a基因在池蝶蚌精巢、肝胰腺、肾脏、鳃、心脏、卵巢、闭壳肌、肠、外套膜、斧足和血淋巴11个组织中均有表达,其中在精巢组织中表达量最高,其次是在卵巢、肝胰腺、肠、斧足、鳃、血淋巴、外套膜、心脏和闭壳肌中,肾脏中的表达量最低,表明Hsfem-1a基因在池蝶蚌不同组织中参与了多种生理活动。以最低表达量的肾脏中Hsfem-1a基因表达量作为参照,Hsfem-1a基因在精巢中的表达量是肾脏中的108倍。同时根据组织表达谱结果分析,利用RT-PCR对Hsfem-1a基因在池蝶蚌性腺不同发育时期精巢中的表达进行了分析检测,发现随着精巢的发育Hsfem-1a基因在增殖期、生长期和成熟期的表达量逐渐增加,在成熟期达到峰值,是增值期的7.72倍,休止期时表达量回落。随着精巢的成熟和精子的发生,池蝶蚌fem-1a基因的表达逐渐增强,结果暗示该基因在池蝶蚌精巢的发育或精子的发生过程中具有重要的作用。
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