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目的:
本研究检测重度子痫前期及正常妊娠妇女胎盘组织自噬相关蛋白LC-3Ⅱ的表达,探讨滋养细胞自噬与重度子痫前期的关系,为进一步揭示重度子痫前期的发病机制提供新的理论依据。
方法:
一、标本来源
选取2012年7月到2013年1月中国医科大学附属盛京医院产科收治的重度子痫前期患者23例,诊断标准参照第七版妇产科学,年龄23~41岁,平均(31.91±5.21)岁,孕周为34.40±2.30周;选取同期孕晚期正常孕妇10例作为对照,年龄22~36岁,平均年龄(29.10±4.48)岁,孕周为34.89±1.28周;经统计学检验两组孕周及年龄无显著差异,所有病例均无高血压、糖尿病、免疫系统疾病及其它特殊疾病史,无妊娠合并症,未服用免疫抑制或增强药物,均以剖宫产术终止妊娠。
二、免疫组化法检测自噬相关蛋白LC-3Ⅱ的表达
剖宫产术中于胎盘娩出后,立即在无菌状态下于胎盘母体面中央位置(避开坏死及钙化区)取一块约1cm×1cm×1cm大小胎盘组织,于灭菌生理盐水中反复漂净后,无菌纱布吸掉水分,将新鲜胎盘组织置于4g/L多聚甲醛中固定后,常规石蜡包埋切片用于免疫组化测定LC-3Ⅱ蛋白的表达情况。
免疫组化结果判断应用自动化图像分析系统对图片进行定量分析,每张切片在40倍镜下进行灰度测定,统计其积分光密度值。
重度子痫前期组LC-3Ⅱ的积分光密度值(IOD)与重度子痫前期患者24小时尿蛋白定量及新生儿体重进行相关性分析。
统计学分析采用统计软件SPSS17.0版统计学处理,两样本均数比较用t检验,两个变量间的相关性分析采用Spearman秩相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。
结果:
LC-3Ⅱ蛋白在两组胎盘滋养细胞中均有表达,主要在细胞质中,并且LC-3Ⅱ蛋白在重度子痫前期患者胎盘中表达增强(见图1)。在重度子痫前期患者胎盘中,LC-3Ⅱ积分光密度值(IOD)95.64±42.15,明显高于相应对照组21.18±6.95,经T检验,t值为t=3.728(P<0.01),两组间有显著统计学差异。
重度子痫前期组中,患者24小时尿蛋白定量与胎盘滋养细胞自噬相关蛋白LC-3Ⅱ的表达呈正相关(r=0.212,P<0.01)。新生儿体重与LC-3Ⅱ的表达呈负相关(r=-0.421,P<0.05)。
结论:
本实验结果表明重度子痫前期患者胎盘自噬相关蛋白LC-3Ⅱ的表达明显高于正常妊娠晚期妇女,并且LC-3Ⅱ的表达与24小时尿蛋白定量呈正相关,与新生儿体重呈负相关,提示重度子痫前期患者胎盘滋养细胞自噬较正常妊娠妇女明显增加;且与子痫前期患者病情严重程度相关。