论文部分内容阅读
背景：肺癌是目前严重威害人类健康和生命的恶性肿瘤之一,根据流行病学相关研究结果,近年来,肺癌的发病率和死亡率呈上升趋势,据统计,占所有恶性肿瘤发病率的12%。在欧美某些国家和我国大中城市,其发病率已居于首位,且发病年龄趋于年轻化,与吸烟、环境污染物密切相关,其治疗难度大、迅速转移、死亡率高为特点。肿瘤的浸润与转移己成为当今导致治疗失败和患者死亡的主要原因,因此寻找关键靶位点抑制肺癌血管生成,为肺癌的临床治疗开辟一条新的途径。核因子-kB (nuclear factor-kappa B, NF-kB)是一种多显性基因转录因子,与多种基因的转录密切相关,在肿瘤细胞中高表达,与多种细胞基因的启动子和增强子发生特异性结合,与血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)、环氧合酶-2(Cyclooxygenase -2, COX-2)关系密切,参与炎症反应、损伤应激、免疫防御、细胞增殖及凋亡等过程。核因子-кB圈套寡脱氧核苷酸(NF-kB decoy ODN)是目前研究发现进行体内外基因调控的强有力工具,含有转录因子识别序列的寡核苷酸或质粒转入细胞,与核内基因启动子区相应顺势作用元件竞争结合转录因子,从而抑制启动子活化,达到抑制基因转录和翻译的目的,其能明显抑制癌细胞的增殖,并可提高肿瘤细胞对化疗药物(紫杉醇)的敏感性。目的：研究NF-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)联合紫杉醇对肺癌A549细胞增殖、凋亡、血管生成的影响及其作用机制,为临床实践提供理论依据。方法：1、培养人肺癌细胞A549。2、脂质体瞬时转染法介导核因子-кB圈套寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)和核因子-кB错义圈套寡核苷酸(NF-κB scramble decoy ODN)处理A549细胞。3、MTT试验观察干预96 h经NF-κB decoy ODN及NF-κB Scramble decoyODN作用后肺癌A549细胞生长曲线。4、设对照组、NF-κB decoy ODN组、紫杉醇组(1000 ng/mL)和NF-κB decoyODN+紫杉醇组,RT-PCR法测环氧合酶-2(COX-2) mRNA水平表达,免疫组织化学法测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,流式细胞术检测各组48 h后细胞凋亡率。结果：1、核因子-кB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)使细胞生长明显受到抑制,时间越长抑制作用越明显。2、核因子-кB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)、紫杉醇干预后A549细胞的环氧合酶-2(COX-2) mRNA水平表达及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达均下降,COX-2mRNA水平表达各组浓度分别是：0.71±1.4μg/μL、0.44±1.8μg/μL、0.51±7.2μg/μL、0.34±9.5μg/μL (F=7.8, P<0.05), VEGF蛋白表达各组细胞阳性率分别是：85±0.50%,63±0.26%,57±1.5%,21±0.34%(F=21,P<0.05)。3、核因子-кB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)联合紫杉醇可促使A549细胞凋亡增加,二者联用呈协同或相加作用,各组细胞的总凋亡率分别是：(16.8±0.01)%、(5.6±0.02)%、(32.6±0.04)%,均高于对照组(6.0±0.02)%(F=14,P<0.05)。结论：1.核因子-кB圈套寡脱氧核苷酸(NF-kB decoy ODN)能明显抑制肺癌A549细胞的生长。2.核因子-кB圈套寡脱氧核苷酸(NF-kB decoy ODN)联合紫杉醇可明显抑制肺癌A549细胞的生长,该作用可能与环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达相关。3.核因子-кB圈套寡脱氧核苷酸(NF-kB decoy ODN)联合紫杉醇可增强对肺癌A549细胞增殖的抑制及凋亡的诱导,二者具有协同抗肿瘤作用。