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目的：过敏性支气管哮喘是一种以T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞等多种炎症细胞和一系列细胞因子参与的,以气道慢性炎症为特征的疾病,目前我国哮喘患病率约为1％,儿童可高达3%,且呈上升趋势,该病的确切发病机制仍不十分清楚。大量的研究表明,过敏性哮喘患者体内存在Th1细胞与Th2细胞的比例失衡,即过敏性哮喘是Th2细胞过度分化导致的过敏性疾病,然而,也有研究发现,与Th1细胞相关的炎症反应并不能减弱支气管哮喘的发病,传统的Th1/Th2比例失衡理论并不能完全解释过敏性支气管哮喘的发病机制。近几年的研究发现,CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)是机体内重要的内源性调节呼吸道炎症过程的细胞,并可能在过敏性哮喘的发病和发展机制中起到关键性的作用;Treg细胞在体内的重要作用是免疫无能性和免疫抑制性,它可以调节机体对非病原体抗原如过敏原的耐受性,并参与调节抗原引起的免疫炎症反应;Treg细胞可能与过敏性哮喘的发生与进展都有密切的关系,有研究发现,在过敏性哮喘患者的外周血中,Treg细胞的数量及功能均有不同程度的降低,但Treg细胞作用的具体机制目前还不完全清楚;转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-35(IL-35)是由CD4+CD25+Treg细胞分泌的,具有抑制免疫应答作用的细胞因子,它们可能是Treg细胞发挥免疫负调节作用的重要介质。
方法：⑴将小鼠随机分为对照组和模型组,模型组小鼠复制哮喘模型。⑵观察两组小鼠被OVA或生理盐水激发时的表现,取肺组织做病理HE染色,用全身体积描计仪(WBP)检测小鼠气道反应性,并检测支气管肺泡灌沈液沉淀中嗜酸性粒细胞百分比,用上述检测结果来判定模型复制是否成功,模型复制成功后用于后续实验。⑶对照组和模型组小鼠行支气管肺泡灌洗,灌洗液离心后用ELISA方法检测上清中OVA特异的IgE、IL-4、IL-10、IL-35和TGF-β1等细胞因子的水平。⑷分离小鼠血液和脾脏中单个核细胞层,用流式细胞仪检测CD4+CD25highTreg细胞占CD4+T细胞的百分比,并应用ELISA方法检测小鼠血清中OVA特异的IgE、IL-4、IL-10、IL-35和TGF-β1等细胞因子的水平。⑸提取两组小鼠肺组织的RNA,逆转录成cDNA,利用SYBR Green I荧光定量PCR的方法检测每个标本中EBI3、P35、IL-10和Foxp3基因的相对表达水平。⑹应用SPSS17.0进行数据的统计与分析;采用GraphPad Prism5进行各种统计图的制作;SYBR Green I荧光定量PCR数据采用2-△△Ct法分析基因mRNA的相对表达量。
结果：①成功复制了小鼠过敏性哮喘模型。②与对照组相比,哮喘模型组小鼠支气管肺泡灌洗液沉淀中嗜酸性粒细胞百分比显著增加(P＜0.05);支气管肺泡灌洗液和血清中OVA特异的IgE和IL-4水平明显提高(P＜0.05),IL-10、IL-35和TGF-β1水平显著降低(P＜0.05)。③与对照组相比,哮喘模型组小鼠血液和脾脏中CD4+CD25highTreg细胞占CD4+T细胞的百分比显著下降(P＜0.05)。④与对照组相比,哮喘模型组小鼠肺组织中EB13和P35 mRNA的相对表达量有所下降但不明显,而IL-10和Foxp3 mRNA的相对表达水平明显下降。
结论：本次试验的研究结果提示:Treg细胞可能和过敏性哮喘有密切的关系,Treg细胞数量的减少或其分泌的抑制性细胞因子水平的降低可能在过敏性哮喘的发病过程中起关键性的作用,Treg细胞可能是治疗过敏性哮喘的潜在靶点。