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巴戟天是四大南药之一,其多糖的含量较高,有较高的药用价值。本文研究了巴戟天多糖成分的提取、纯化,优化了超声波提取法,脱蛋白方法,并用DEAE—52纤维素柱对巴戟天精多糖进行了分级分离。研究了巴戟天粗多糖和精制多糖的抗氧化活性,以及二者对体外培养人宫颈癌Hela细胞生长的影响。主要结果如下:
1.采用提取时间、温度、液料比的单因素水平试验和三因素三水平的正交试验优化超声波法提取巴戟天多糖的条件。以水为溶剂,巴戟天多糖的最佳提取条件为:液料比35:1,浸提温度80℃,浸提时间为超声提取45min热水浸提1h。巴戟天多糖含量为3.375%,高于热回流法。超声波法能有效提取巴戟天多糖,优于常规热水回流提取法。
2.考察了Sevag法、三氯乙酸法、酶+Sevag、酶+三氯乙酸法对巴戟天粗多糖所含蛋白的脱除效果。四种方法对蛋白质的去除率的强弱依次为:酶+三氯乙酸法>酶+Sevag法>三氯乙酸法>Sevag法。多糖损失率分别为:Sevag法>酶+Sevag法>酶+三氯乙酸法>三氯乙酸法。从多糖的损失率以及经济的程度来看,适合采用酶解+三氯醋酸结合的方法。得到了无蛋白质的精制多糖后,用DEAE—52纤维素柱对多糖进一步的纯化分离,得到了三种成分。经UV扫描后不含蛋白质。
3.由总抗氧化能力测定结果可知巴戟天粗多糖和精多糖均有一定的抗氧化能力,且均能够清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子,抑制Fe2+诱发的脂蛋白过氧化。
4.采用MTT法、细胞形态观察法、细胞生长曲线法检测了巴戟天粗多糖和精多糖在体外对人宫颈癌Hela细胞生长的影响。巴戟天粗多糖和精多糖均可抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并呈剂量效应和时间效应关系,MOCP各浓度之间存在极显著性差异(p<0.01)。MOPP的高浓度之间存在极显著性差异(p<0.01)。对于两种多糖,400、500μg/mL情况下,2d、4d、6d之间存在显著性差异(p<0.01或p<0.05)。此外巴戟天粗多糖对抑制人宫颈癌Hela细胞增殖的效果比精制多糖的效果要好。