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研究背景与目的冠状动脉疾病(CAD)是冠状动脉粥样硬化斑块病理性聚集于冠脉管腔,导致其变狭窄后堵塞的一种疾病。冠脉血流恢复越早越可能对心肌功能恢复产生至关重要作用。目前治疗的主要外科手段是用白体血管绕过堵塞的血管段形成旁路,即冠脉搭桥术(CABG)。人大隐静脉(SV)一直被用作主要移植血管,因为其对大多数患者而言不是不可或缺,容易工作,容易采集,管腔巨大等。而其主要缺点是较低的通畅率。目前针对移植失败有不少治疗方法,比如No-touch技术,内窥镜静脉采集,使用抗血小板药物,基因治疗等。但静脉桥的中远期通畅率并无明显改变。故如何提高中远期通畅率成为了研究热点。本研究将通过细胞实验和动物实验来探讨他克莫司是否能抑制大鼠自体静脉移植术后静脉桥内膜增生,为药物治疗CABG术后再狭窄提供参考。研究方法随机选用健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠28只,体重200-240g。随机分为他克莫司实验组(n=14)和安慰剂对照组(n=14)。实验组给以他克莫司(0.2mg/kg)肌注,对照组肌注相同体积生理盐水,每天1次,持续1周。处理完毕后行自体右颈外静脉-颈总动脉移植术,术后继续原方案干预。于术后第2周和第4周处死大鼠,采集静脉桥。制备组织病理切片,应用计算机图像分析软件测量新生内膜厚度；提取组织蛋白,蛋白印迹技术(Western Blot)技术检测p27蛋白表达情况。体外细胞实验部分：培养人大隐静脉平滑肌细胞。增殖实验按：1、实验组A(0.4nmol·L-1他克莫司),2、实验组B(4nmol·L-1他克莫司),3、实验组C(40nmol·L-1他克莫司),4、实验组D(400nmol·L-1他克莫司),5、实验组E(4000nmol·L-1他克莫司),6、对照组(等量PBS)。干预4天后，MTT法检测细胞增殖情况。迁移实验按：1、实验组A(2nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb),2、实验组B(20nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb),3、实验组C(200nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb),4、实验组D(2000nmol·L-1他克莫司+PDGF-bb),5、对照组(等量PBS+PDGF-bb),干预24小时,Transwe9ll小室法检测细胞迁移情况。结果 大鼠自体颈外静脉-颈总动脉移植术后,第2周时,新生内膜厚度比较,第2周时新生内膜厚度比较,他克莫司实验组明显小于对照组[(20.56±4.55)μm VS(28.35±5.86)μm,P<0.05].第4周时,他克莫司实验组仍明显小于对照组[(36.22±6.33)Iμm VS(62.13±7.60) μ m,P<0.01]。Western Blot检测发现术后2周新生内膜中p27蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),4周更为显著。细胞增殖实验中,培养4天后,相比对照组,实验组A组的抑制率为8%,B组抑制率为19%,C组抑制率为38%,D组抑制率为61%,E组抑制率为99%。差异有统计学意义(P<0.05)。细胞迁移实验中,干预24小时后,加入他克莫司组的迁移细胞数均小于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论他克莫司对自体静脉移植术后静脉桥再狭窄具有明显抑制作用,其机制可能与p27蛋白表达上调,抑制了静脉平滑肌细胞增殖与迁移有关。