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重组鸡痘病毒活载体疫苗的研究在近十几年来取得了很大进展,从根本意义上显示出常规疫苗无可比拟的优势,已有多种病原的保护性抗原在FPV中得以表达,其中包括表达禽流感HA的重组活载体疫苗。本文对单表达禽流感H5亚型血凝素(HA)基因的的重组鸡痘病毒的免疫效力做了评估,并对CEF感染rFPV-H5HA后进行了定位研究。1.重组鸡痘病毒rFPV-SYHA在SPF鸡上的免疫效力实验将SPF鸡随机分为5组,每组6羽,将rFPV-SYHA用灭菌PBS进行稀释,免疫剂量分别为2×104、2×103、2×102、20及2 PFU/羽。以颈部皮下注射方式进行免疫。于免疫后的第21天,将SY株AIV经PBS稀释后,以1×105EID50/羽的剂量通过滴鼻点眼途径进行攻毒。攻毒后连续观察两周,统计发病死亡情况,并于攻毒后的第2、4和7天对各组鸡采集气管及泄殖腔棉拭子,接种10日龄SPF鸡胚做病毒分离试验。与rFPV (2PFU)免疫组相比,rFPV(2×104 PFU)及全病毒灭活疫苗在攻毒后第4天显著降低了气管的排毒率。其它时间点上,各免疫组之间的排毒率无显著差异。与未免疫攻毒对照组相比,rFPV(2×102 FPU)及以上剂量组均显著降低了死亡率,其中rFPV(2×104 PFU)免疫组未出现发病及死亡。rFPV(2×103 PFU)及更低的免疫剂量组均有不同程度死亡。所有试验鸡分别在免疫后6,13,21采血,分离血清,用HI试验测定血清中的抗体效价。2.CEF感染rFPV-H5HA后的动态定位和超微结构的观察本实验运用间接酶免疫组织化学方对培养的成纤维细胞上接种重组鸡痘病毒上表达的HA基因进行定位检测和直观判断,结果表明抗H5单克隆抗体稀释浓度为1:200时,免疫染色效果较好。HA蛋白的表达中,胞浆型,胞膜型,胞核型都能见到,最常见的是前两种,且在接种病毒12小时后才有阳性表达。表达量随时间的增加并无显著增加,推测这与重组病毒时所用启动子有关。利用透射电镜观察发现,CEF细胞感染rFPV-H5HA48h后,才在CEF细胞中观察到明显的重组鸡痘病毒,可能是在细胞的感染初期,重组病毒复制数量有限。