论文部分内容阅读
背景和目的
先天性巨结肠症又称为赫希施普龙病(Hirschsprungs disease,HD)是一种比较常见的小儿消化道发育畸形,属于一种先天性疾病。发病率约为1/5000,存在一定的性别差异,男女比例约为4:1。HD是造成结肠肠管增粗的原因之一,可发生在近端结肠,主要位于乙状结肠和部分降结肠;也可发生在直肠和远端乙状结肠;HD患儿结肠狭窄段和扩张段两部分结肠组织之间有一过渡或移形区,往往呈漏斗形,长约3cm-8cm不等。已有实验证实了转录因子NKX2-1基因蛋白在整个肠神经系统的发育中存在。近年来NKX2-1的研究主要集中在甲状腺、脑及肺组织等有关神经系统发育疾病过程的研究中,在肠神经系统的研究比较少。先天性巨结肠患儿的肠蠕动功能可能与转录因子NKX2-1基因蛋白在HD患儿肠管管壁中的表达存在一定的相关性,本次实验的目的是应用免疫组化SP法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术定性和定量测定转录因子NKX2-1基因在HD患儿结肠壁中的表达,以便更加深入的了解HD在分子基础上的确切发病机制,为HD疾病的临床诊断提供可靠的参考。
材料和方法
1应用免疫组化SP法观察30例HD手术切除标本(分别取HD患儿狭窄段、移行段、扩张段结肠壁全层组织)同时取30例肠套叠患儿手术切除并具备神经节细胞的全层结肠组织做为对照组,观察各组织标本中转录因子NKX2-1基因在HD患儿结肠壁中的表达情况;
2应用逆转录聚合酶链反应方法检测30例新鲜的HD手术切除标本(包括HD患儿狭窄段、移行段、扩张段全层结肠组织)和30例肠套叠患儿手术切除的存在神经节细胞的全层结肠组织做对照组,观察转录因子NKX2-1基因在HD患儿结肠组织中的表达情况:
3统计学处理:数据应用SPSS17.0软件处理,HD患儿各组结肠组织和正常对照组结肠组织中转录因子NKX2-1基因蛋白表达的比较采用两个独立样本的秩和检验;HD患儿各组结肠组织和正常对照组结肠组织中转录因子NKX2-1mRNA表达的比较采用两个独立样本的t检验或校正t检验。检验水准a=0.05。
结果
1转录因子NKX2-1在巨结肠患儿窄段结肠组织中表达明显减少,在扩张段结肠组织中表达正常,在移行段中的表达处于二者之间。
2 HD患儿狭窄、移行段结肠组织中转录因子NKX2-1基因蛋白和mRNA表达与正常对照组结肠组织中转录因子NKX2-1基因蛋白的mRNA表达进行比较,差异有统计学意义(Z=5.236和2.926,P＜0.008;t=19.475和14.429,P＜0.05),HD患儿扩张段结肠组织和对照正常结肠组织中NKX2-1蛋白和mRNA的表达比较,差异无统计学意义(Z=2.336,P=0.019＞0.008;t=0.985,P=0.329＞0.05)。
结论
1 HD患儿狭窄段结肠壁组织中缺少转录因子NKX2-1基因的表达可能是HD发病的基本病理改变之一。
2转录因子NKX2-1基因在HD患儿结肠组织中表达减少可能是导致HD发病的原因之一。