诱导子对海南粗榧悬浮细胞生长及三尖杉酯类碱合成的影响

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本文以茉莉酸甲酯(Methyl jasmonic acid,简称MJ)、水杨酸(salicylic acid,简称SA)、内生真菌培养液(fungal endophyte culture supernatant,简称FE)为诱导子,在培养不同阶段(10、15、20d)分别添加不同浓度的茉莉酸甲酯(50、100、150μmol/L)、水杨酸(25、50、100μmol/L)、内生真菌培养液(2、4、6mL),通过测定细胞平均比生长速率、细胞活力、培养液褐化值、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,简称PAL)活力、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(glucose6-phosphate dehydrogenase,简称G6DPH)活力及三尖杉酯类碱产量,考察3种诱导子单独添加及联合使用对海南粗榧悬浮细胞生长及三尖杉酯类碱产量的影响。结果如下:在细胞生长方面,各浓度MJ和FE均可降低细胞平均比生长速率,且细胞平均比生长速率与MJ、 FE添加量成反比。SA浓度实验发现,50μmol/L SA可在一定程度上促进细胞生长,细胞平均比生长速率是对照的1.09倍。联合诱导实验结果表明:低浓度SA可有效缓解MJ、 FE对细胞的损害作用。50μmol/L SA和100umol/L MJ同时添加细胞平均比生长速率比MJ单独添加提高14.28%;25μmol/L SA和4mL FE同时添加细胞平均比生长速率比FE单独添加提高9.52%。在PAL活力及培养液褐化方面:实验选取了最佳浓度的MJ(100μmol/L)、 SA(50μmol/L). FE(4mL),分别测定了添加后72h内PAL活力的变化值并与对照作比较。结果表明:MJ、 SA、 FE均可提高细胞PAL活力,并在24h达到最大值。培养液褐化值在添加MJ、 SA、 FE后5d内迅速提高,褐化程度与诱导子的添加浓度成正相关,且诱导子联合使用会加剧培养液的褐化程度。在G6DPH活力方面:实验选取了最佳浓度的MJ(100umol/L)、 SA(50μmol/L)、 FE(4mL),分别测定了添加后72h内G6DPH活力的变化值与对照作比较。结果表明:FE可提高G6DPH活力,并在48h达到最大值,而MJ, SA组与对照无显著差异,说明MJ和SA的作用点不在G6DPH。在三尖杉酯类碱产量方面:MJ、 SA、 FE单独使用的最佳浓度分别为100μmol/L、50μmol/L、4mL,最佳添加时间分别为第15d、15d、10d。诱导子联合使用比单独添加更利于产物的合成。结果表明:100μmol/L MJ和50μmol/L SA同时添加三尖杉酯类碱产量最高,是对照的4.18倍。
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