【摘 要】
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基因组规模的基因敲除是研究全局遗传相互作用的一种重要方法。目前,酿酒酵母中的遗传相互作用网络是被揭示得相对全面的。系统性的基因敲除和基因组规模的遗传分析为遗传相互作用的研究提供了重要的基础。但是,大规模的遗传相互作用研究耗时耗力,并且传统的基因敲除方法难以研究涉及多基因的复杂遗传相互作用。酵母合成型基因组中整合了SCRaMbLE系统(Synthetic Chromosome Rearrangeme
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基因组规模的基因敲除是研究全局遗传相互作用的一种重要方法。目前,酿酒酵母中的遗传相互作用网络是被揭示得相对全面的。系统性的基因敲除和基因组规模的遗传分析为遗传相互作用的研究提供了重要的基础。但是,大规模的遗传相互作用研究耗时耗力,并且传统的基因敲除方法难以研究涉及多基因的复杂遗传相互作用。酵母合成型基因组中整合了SCRaMbLE系统(Synthetic Chromosome Rearrangement and Modification by Lox Psym-mediated Evolution),可以诱导合成型染色体重排,提供了一种产生具有随机删除菌株库的方法。本论文采用酵母合成型三号染色体(synⅢ)开展基因组重排实验。在synⅢ酵母体内通过同源重组方法一次组装了野生型三号染色体(chrⅢ)上的所有14个必需基因,用于替代合成型染色体上必需基因的功能。基于必需基因的成簇化,实现了基因组重排删除synⅢ上的必需基因。此外,通过不同的基因排列顺序(gene order)成簇化组装必需基因,研究基因排列顺序对于基因表达水平的影响。本论文证实了在酵母中成簇化组装chrⅢ上的所有必需基因可以维持基因的相对正常表达。但是,在个别情况下,基因排列顺序影响个别基因的转录水平。在携带成簇化必需基因的合成型酵母中对synⅢ进行染色体重排,探索合成致死基因相互作用。通过检测141株染色体重排删除菌,表明三号染色体上不同区域的DNA片段发生删除的频率不同,存在发生删除的热点区域和冷点区域。对于冷点区域的DNA片段,通过在二倍体酵母中四分体拆孢方法进行片段必需性的验证,发现synⅢ上82-88kb和227-244 kb区域无法被删除,存在合成致死的相互作用。本论文证实了含有成簇化必需基因的基因组重排能够对酵母合成型染色体上含有必需基因的区域进行删除,加强了合成型染色体的精简,也证实了SCRaMbLE是一种研究酵母复杂的遗传相互作用的新策略。
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