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正常细胞的代谢途径已然错综复杂，肿瘤细胞因其异质性，使其代谢方式更为复杂。代谢重编程是肿瘤细胞的一个显著特征。脂肪酸2-羟化酶(FA2H)，可催化生成2-羟基脂肪酸，在神经髓鞘的形成，表皮细胞的通透性屏障功能以及脂肪细胞的脂肪生成过程中发挥着重要作用。已知FA2H亦在部分结肠癌细胞中高表达，但其在结肠癌发生发展中的调控作用却鲜见报道。因此，本论文借助基于TMT和SILAC标记的定量蛋白质组学技术系统考察FA2H对人结肠癌LoVo细胞全蛋白表达谱的影响，并对其进行生物信息学分析。基于此，本论文亦对FA2H在结肠癌发生发展中可能参与调控的生物过程或途径进行系统研究。
目的：
运用基于TMT和SILAC标记的定量蛋白质组学探究FA2H对人结肠癌LoVo细胞全蛋白表达谱的影响，从肿瘤细胞代谢角度分析FA2H对结肠癌侵袭、迁移、发生发展等影响的分子机制。
方法：
1、慢病毒介导稳定敲降FA2H的LoVo细胞的构建。2、运用qPCR及Wesernblot实验从mRNA和蛋白水平检测LoVo细胞FA2H的敲降效率。3、运用CCK8实验及流式细胞周期实验检测稳定敲降FA2H细胞与对照组细胞的增殖。4、运用Transwell和划痕实验检测稳定敲降FA2H细胞与对照组细胞的侵袭和迁移能力。5、运用流式细胞术检测稳定敲降FA2H细胞与对照组细胞的凋亡。6、运用基于TMT和SILAC标记的定量蛋白质组学探究FA2H对LoVo细胞全蛋白表达谱的影响。7、运用生物信息学软件分析FA2H介导的细胞生物过程、分子功能、信号通路等。8、运用生物学技术检测FA2H对LoVo细胞葡萄糖摄取、ATP水平、乳酸含量、ROS水平及线粒体膜电位的影响。9、运用蔗糖梯度离心技术提取细胞脂筏，并运用基于SILAC标记定量蛋白质组学技术分析FA2H对脂筏蛋白组的影响。
结果：
1、成功构建慢病毒介导稳定敲降FA2H的LoVo细胞。
2、人结肠癌LoVo细胞中，稳定敲降FA2H促进细胞凋亡，抑制细胞迁移，而对细胞增殖能力影响并不显著。
3、运用基于TMT和SILAC的定量蛋白质组学技术探究FA2H对人结肠癌LoVo细胞全蛋白表达谱的影响，发现FA2H在LoVo细胞中参与调控了氧化磷酸化、糖酵解途径、氨基酸代谢等细胞能量代谢通路。
4、人结肠癌LoVo细胞中，稳定敲降FA2H抑制了低氧诱导因子1α(HIF1α)转录因子的表达，不仅削弱了葡萄糖摄取及糖酵解途径，使乳酸水平降低，而且促进细胞氧化磷酸化，使细胞内ATP水平升高。
5、人结肠癌LoVo细胞中，FA2H的下调抑制了抗氧化蛋白GPX4和TXN的表达，使得细胞内的ROS水平增加，抑制了细胞生长，促进细胞凋亡。
6、人结肠癌LoVo细胞中，FA2H通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路影响细胞生长及代谢过程。
7、人结肠癌LoVo细胞中，FA2H的下调促进小窝蛋白Caveolin-1的表达，或可通过调控脂筏结构组成影响细胞迁移。
结论：
1、FA2H通过促进低氧诱导因子(HIF1α)转录因子的表达，增加细胞葡萄糖摄取能力及糖酵解途径，降低细胞氧化磷酸化水平，避免过量ROS的产生损伤细胞，促进细胞迁移及生长。
2、FA2H通过上调PI3K/Akt/mTOR细胞生长信号通路，促进细胞生物分子合成、细胞生长及代谢。
目的：
运用基于TMT和SILAC标记的定量蛋白质组学探究FA2H对人结肠癌LoVo细胞全蛋白表达谱的影响，从肿瘤细胞代谢角度分析FA2H对结肠癌侵袭、迁移、发生发展等影响的分子机制。
方法：
1、慢病毒介导稳定敲降FA2H的LoVo细胞的构建。2、运用qPCR及Wesernblot实验从mRNA和蛋白水平检测LoVo细胞FA2H的敲降效率。3、运用CCK8实验及流式细胞周期实验检测稳定敲降FA2H细胞与对照组细胞的增殖。4、运用Transwell和划痕实验检测稳定敲降FA2H细胞与对照组细胞的侵袭和迁移能力。5、运用流式细胞术检测稳定敲降FA2H细胞与对照组细胞的凋亡。6、运用基于TMT和SILAC标记的定量蛋白质组学探究FA2H对LoVo细胞全蛋白表达谱的影响。7、运用生物信息学软件分析FA2H介导的细胞生物过程、分子功能、信号通路等。8、运用生物学技术检测FA2H对LoVo细胞葡萄糖摄取、ATP水平、乳酸含量、ROS水平及线粒体膜电位的影响。9、运用蔗糖梯度离心技术提取细胞脂筏，并运用基于SILAC标记定量蛋白质组学技术分析FA2H对脂筏蛋白组的影响。
结果：
1、成功构建慢病毒介导稳定敲降FA2H的LoVo细胞。
2、人结肠癌LoVo细胞中，稳定敲降FA2H促进细胞凋亡，抑制细胞迁移，而对细胞增殖能力影响并不显著。
3、运用基于TMT和SILAC的定量蛋白质组学技术探究FA2H对人结肠癌LoVo细胞全蛋白表达谱的影响，发现FA2H在LoVo细胞中参与调控了氧化磷酸化、糖酵解途径、氨基酸代谢等细胞能量代谢通路。
4、人结肠癌LoVo细胞中，稳定敲降FA2H抑制了低氧诱导因子1α(HIF1α)转录因子的表达，不仅削弱了葡萄糖摄取及糖酵解途径，使乳酸水平降低，而且促进细胞氧化磷酸化，使细胞内ATP水平升高。
5、人结肠癌LoVo细胞中，FA2H的下调抑制了抗氧化蛋白GPX4和TXN的表达，使得细胞内的ROS水平增加，抑制了细胞生长，促进细胞凋亡。
6、人结肠癌LoVo细胞中，FA2H通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路影响细胞生长及代谢过程。
7、人结肠癌LoVo细胞中，FA2H的下调促进小窝蛋白Caveolin-1的表达，或可通过调控脂筏结构组成影响细胞迁移。
结论：
1、FA2H通过促进低氧诱导因子(HIF1α)转录因子的表达，增加细胞葡萄糖摄取能力及糖酵解途径，降低细胞氧化磷酸化水平，避免过量ROS的产生损伤细胞，促进细胞迁移及生长。
2、FA2H通过上调PI3K/Akt/mTOR细胞生长信号通路，促进细胞生物分子合成、细胞生长及代谢。