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研究背景双酚A（bispheno1A，BPA）是生产碳酸聚酯、塑料制品等工业产品的原材料，用于奶瓶、可重复用水杯、牙密封剂、食品与饮料的包装材料、水管、热敏纸、卡板纸及其他产品的添加剂等制造。据报道，2008年BPA一年的产量高达80亿磅，而且以每年6%~10%的速度增长。BPA在高温、聚合不完全、长期使用等情况下通过酯键水解而释放，导致人群及动物的慢性低剂量暴露。BPA具有拟雌激素作用，通过干扰雌激素活性等途径对人体多个系统如内分泌、生殖、发育等产生有害作用，而孕期及生命早期（包括婴幼儿期、青春期等）暴露BPA，可能与发育期免疫功能异常及相关疾病有关，这引起了广泛的关注。流行病学研究提示，生命早期暴露如BPA等内分泌干扰物可能是过去几十年发达国家儿童哮喘、过敏性皮炎、糖尿病、儿童肿瘤发病率上升的原因之一。动物实验对围生期或成年期BPA等内分泌干扰物暴露诱导的免疫毒性的研究越趋增多，但至今BPA暴露引起的免疫发育毒性机制尚未完全阐明。Treg细胞对机体发挥维持免疫稳态和免疫负性调控的关键作用，有报道称成年期BPA暴露能抑制Treg细胞数量，使T/B细胞及巨噬细胞等应答过度，导致免疫功能异常及免疫性疾病。本课题组假设母鼠孕期及哺乳期BPA暴露，诱导的仔鼠免疫功能的异常与失衡，可能与BPA抑制Treg细胞数量这一途径有关。研究目的通过检测孕期和哺乳期经水暴露不同剂量BPA母鼠所生仔鼠断乳期及青春期脾脏Treg细胞数量、特征性转录因子Foxp3mRNA表达水平及血清中IL-10、TGF-β含量，结合仔鼠生长发育状况，探讨围生期BPA暴露对子代Treg细胞的影响。研究方法选用SPF级8周龄ICR雌鼠、9周龄ICR雄鼠；适应性饲养1周，按照雌：雄比例2:1合笼交配，雌鼠查到阴栓确认为妊娠，将孕鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组（DMSO）、BPA低中高剂量组（2.2829、22.829、228.29μg/L）。母鼠自妊娠开始日（GD0）至仔鼠断乳（PND21）经饮水暴露BPA，PND21与PND42处死仔鼠，收集外周血并取脾脏；流式细胞仪检测仔鼠脾脏Treg细胞数量；荧光定量RT-PCR检测脾脏Treg细胞特征性转录因子Foxp3mRNA表达水平；ELISA检测血清中IL-10、TGF-β含量；使用SPSS15.0统计软件分析实验结果。结果1一般情况母鼠孕期状况良好，未出现死亡、流产、死胎、死产等情况；组间饮水量差异无统计学意义，约为0.12ml/（g·d）；母鼠孕期体重差异无统计学意义。仔鼠出生性别比及平均窝仔数差异均无统计学意义；仅PND42时高剂量组仔鼠体重较空白对照组有显著增加（P<0.05），其余各时点各组间仔鼠体重差异均无统计学意义。2围生期BPA暴露对仔鼠Treg细胞的影响2.1对仔鼠脾脏Treg细胞数量的影响围生期BPA暴露后仔鼠脾脏Treg细胞数量随母鼠BPA暴露剂量的增加而呈下降趋势。PND21时中、高剂量组Treg细胞数量与对照组相比明显降低，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01），而低剂量组则无明显差异；PND42时各组间Treg细胞数量均无明显差异，BPA暴露组仔鼠Treg细胞数量与对照组相比则表现为轻微下降，但与PND21相比，BPA暴露组Treg细胞数量均所有回升。2.2对仔鼠脾脏Foxp3mRNA表达的影响暴露组仔鼠Foxp3mRNA表达水平随母鼠BPA暴露剂量的增加而呈下降趋势。PND21时中、高剂量组Foxp3mRNA表达水平与对照组相比有明显降低（P<0.05，P<0.01），而低剂量组则无明显差异；PND42时各组间Foxp3mRNA表达水平相比均无明显差异，与对照组相比，BPA暴露组表现为轻微下降，但与PND21时相比，BPA暴露组Foxp3mRNA表达水平均所有回升。3对Treg细胞相关细胞因子的影响3.1对仔鼠血清IL-10水平的影响PND21时高中低剂量组仔鼠血清IL-10含量随剂量增加而逐渐下降，高剂量组IL-10含量与对照组相比有显著降低（P<0.05），低、中剂量组与对照组相比虽有降低但差异均无统计学意义；PND42时各组仔鼠血清IL-10含量均无显著差异，暴露组与对照组相比均有减少，与PND21相比则均有所回升。3.2对血清TGF-β水平的影响PND21时高中低剂量组仔鼠血清TGF-β含量随剂量增加而逐渐上升，高、中剂量组TGF-β含量与对照组相比有显著增加（P<0.05，P<0.01），低剂量组与对照组相比差异无统计学意义；PND42时低、中、高剂量组与对照组相比呈逐渐增加，但差异无统计学意义，与PND21相比则5组均有下降，而暴露组下降幅度更为明显。4仔鼠血清IL-10、TGF-β水平与Treg细胞数量的相关性相关性分析显示仔鼠血清IL-10含量与Treg细胞数量之间存在不显著正相关；而TGF-β含量与Treg细胞数量之间存在显著负相关。结论1围生期BPA暴露对孕鼠、断乳前仔鼠体重无明显影响。2围生期暴露BPA降低仔鼠断乳期Treg细胞数量及Foxp3mRNA表达水平。3围生期暴露BPA对Treg细胞相关细胞因子有影响：降低血清中IL-10含量，增加血清中TGF-β含量。4围生期暴露BPA，仔鼠Treg细胞数量的减少与相关细胞因子含量存在相关。