不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液内HSP70水平和肺损伤关系的研究

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目的:研究支气管肺泡灌洗液中热休克蛋白70(HSP-70)、细胞因子在机械通气肺损伤中的作用机制。观察不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)内热休克蛋白(HSP-70)含量的变化;观察不同潮气量机械通气后BALF内细胞因子白介素6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)含量的变化,及其与BALF内热休克蛋白(HSP-70)含量的关系;观察不同潮气量机械通气后肺组织的肺损伤评分和凋亡指数,及其与BALF内热休克蛋白(HSP-70)含量的关系。方法:雄性SD大鼠36只,随机分为3组,大潮气量机械通气组(HV)、小潮气量机械通气组(LV)、正常对照组(N)。大鼠麻醉后,颈部皮肤消毒后行气管切开插管固定,并以电热垫维持大鼠体温在37摄氏度左右。HV组, LV组均连接小动物呼吸机以行机械通气;N组保留自主呼吸室内空气,单笼饲养。HV、LV组潮气量(V t)值分别为25ml/kg,7mL/kg,通气时间4h,吸呼比1:2。10%水合氯醛(0.3mL/kg)腹腔注射麻醉后,每半小时追加首剂的1/3,维持大鼠麻醉状态。在机械通风后,处死大鼠用生理盐水肺灌洗。收集的BALF经离心后,上清液分装保存在-80°C冰箱中以供将来使用。(1)BALF离心后,沉渣重新悬后,光学显微镜下用细胞计数板行白细胞计数,及涂片瑞氏染色后行白细胞分类计数;(2)采用BCA方法测定大鼠BALF中总蛋白质浓度的含量;采用ELISA方法测定大鼠BALF中HSP-70和IL-6、MIP-2的含量;(3)肺组织石蜡切片后行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察病理学变化及行肺损伤评分,评估肺组织的损伤程度;(4)采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL法)检测肺组织石蜡切片的细胞凋亡情况,评估肺组织细胞的凋亡指数。结果:1.与正常对照组比较,小潮气量机械通气组和大潮气量机械通气组大鼠BALF中白细胞计数及中性粒细胞分类计数均显著性升高(P<0.05)。2.与正常对照组比较,小潮气量机械通气组和大潮气量机械通气组大鼠BALF中HSP-70、IL-6、MIP-2水平以及肺损伤病理评分、肺凋亡指数均显著性升高(P<0.05)。3.与小潮气量机械通气组比较,大潮气量机械通气组大鼠BALF中HSP-70、IL-6、 MIP-2的水平以及肺损伤病理评分、肺凋亡指数也均显著性升高(P<0.05)。4.大潮气量机械通气组大鼠BALF中IL-6、MIP-2以及肺损伤病理评分别与HSP-70呈显著正相关(P=0.01, r=0.8538; P=0.01, r=0.8919; P=0.01, r=0.8852)。结论:1)大潮气量机械通气可致肺上皮细胞损伤或坏死增加,HSP-70释放到气道内的量明显增加,促进细胞因子释放;而肺内炎症反应显著增强,可能进一步加重肺组织的损伤及细胞凋亡的发生。2)小潮气量机械通气相对大潮气量机械通气,肺上皮细胞损伤或坏死程度较轻,HSP-70胞外释放及细胞因子较少,肺内炎症反应较轻,细胞凋亡少。3)因此机械通气时,机械牵拉造成肺组织细胞的损伤,细胞内HSP-70释放入气道,促进细胞因子的释放,加重肺部炎症反应,促进肺组织细胞凋亡的发生。
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